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貨號	FS-X10216

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：鈣鹽染色液(改良茜素紅S法)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：3×50ml

貨號：FS-X10216

產(chǎn)品介紹:

用途：

用于顯示未經(jīng)脫鈣處理的冰凍、石蠟包埋組織及培養(yǎng)的細胞中的鈣鹽染色。

注意事項：

又稱McGee-Russell茜素紅法，鈣沉積物成橙紅色，染色時間取決于鈣的含量，檢測少量鈣時更有效。復(fù)染液為mayer蘇木素。

儲存條件：4℃，避光，12個月

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

土地叢毛單胞菌G蛋白偶合受體激1抗體Human TBCB 大鼠角化生長因子(KGF)免疫試劑盒

粉狀畢赤酵母促胃泌釋放肽抗體Human TBX21/T-bet 大鼠角化內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)免疫試劑盒

麥根腐平臍蠕孢磷化G蛋白通路抑制蛋白1抗體Human TDGF1(TeRatocarcinoma-derived growth factor 1) 大鼠膠質(zhì)系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)免疫試劑盒

解烴棒桿菌腦糖原磷化抗體Human NPR2(Atrial natriuretic peptide receptor 2) 大鼠膠原吡啶交聯(lián)(PYD)免疫試劑盒

Fusarium venenatum NirenbergG基丁受體3抗體Human TAP1 大鼠膠原C末端肽(CTX)免疫試劑盒

短小芽孢桿菌G基丁受體α3抗體Human TBCC 大鼠降鈣原(PCT)免疫試劑盒

草木樨中華根瘤菌GEN1蛋白抗體Human MTTP(Microsomal triglyceride transfer protein large subunit) 大鼠降鈣基因相關(guān)肽(CGRP)免疫試劑盒

光滑青霉谷酰磷核糖基焦磷酰基轉(zhuǎn)移Human TBCD 大鼠降鈣(CT)免疫試劑盒

蜂房哈夫尼菌α-半乳糖抗體Human TBCA 大鼠堿性磷(ALP)免疫試劑盒

豌豆根瘤菌蛋白偶聯(lián)受體55抗體Human TARS2 大鼠堿性成纖維生長因子6(bFGF-6)免疫試劑盒

香菇生長抑制DNA損傷基因45γ抗體 GADD45γHuman TARSL2 大鼠堿性成纖維生長因子4(bFGF-4)免疫試劑盒

孟氏假單胞菌生長停滯特異性蛋白2家族3抗體Human TAF1L 大鼠堿性成纖維生長因子(bFGF)免疫試劑盒

麥根腐平臍蠕孢顆粒K抗體Human TAF1 大鼠甲狀腺抗體(TAb)免疫試劑盒

灰葡萄孢菌*甘油磷二酯磷結(jié)構(gòu)域5抗體Human TAF3 大鼠甲狀腺(T4)免疫試劑盒

球孢白僵菌γ谷酰轉(zhuǎn)移抗體Human TAF6L 大鼠甲狀腺球蛋白IgG抗體免疫試劑盒

克魯斯假絲酵母G1基丁A型受體α1抗體Human TAF5L 大鼠甲狀腺球蛋白(TG)免疫試劑盒

構(gòu)巢裸孢殼Emericella│nidulans 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,≥99.0%(GC)鹽益母草堿

地芽孢桿菌Geobacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,≥99.5%(GC)去異波爾定

被孢霉屬Mortierella│sp. 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品土荊皮乙
鈣鹽染色液(改良茜素紅S法)谷棒桿 5-溴-2-三氟甲苯干擾

層迭靈芝 2,4,6-三氟苯轉(zhuǎn)化生長因子

微金放線媒介紅p62

*鎖擲孢酵母 6-氨基煙甲酯微管相關(guān)蛋白輕鏈3II

木拉克酵母 5-吡-2-羧血清淀粉樣蛋白A2

粘孢白僵 4-苯氧基乙白介25

枯草芽孢桿 Nα-(叔丁氧羰基)-τ-對甲苯磺酰基-L-組單類神經(jīng)遞質(zhì)

屎腸球 N-芐氧羰基-DL-亮5′2 羥色

芽孢桿屬 N(α)-Z-L-2,3-二氨基I型膠原蛋白

腫大地桿 2-氨基-3,5-二溴吡啶精氨基琥珀合成

地霉雙足囊 5-氨基-2,4,6-三間苯二甲血清淀粉樣蛋白A1

棒狀乳桿棒狀亞種 1-(2-甲氧苯基）哌Flt3配體

細鏈格孢 N-乙酰-L-谷氨酰脂肪型脂肪結(jié)合蛋白4

氣生鞘氨單胞胍乙糖原合成激

三葉草根瘤季戊四三烯酯, 300-400ppm 4-甲氧基做穩(wěn)定劑蛋白磷脂
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)