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髓鞘染色液(固綠法)

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具體成交價以合同協議為準

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-16 15:33:55瀏覽次數:177次

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貨號 FS-X10065
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產品介紹:

用途:

髓鞘染色,石蠟切片

注意事項:

染色結果為:髓鞘呈深綠色,脫髓鞘纖維不著色。

儲存條件:室溫,避光,12個月

中文名稱:髓鞘染色液(固綠法)

英文名稱:

產品規格:3×50ml

貨號:FS-X10065

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

金白F4(金針菇)胰羧肽A6抗體Human 12-LO(Arachidonate 12-Lipoxygenase) 人骨形成蛋白4(BMP4)免疫試劑盒

美澳型核果褐腐病菌9號染色體開放閱讀框150抗體Human TOR2A(Prosalusin) 人骨涎蛋白(BSP)免疫試劑盒

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毛瓣雞血藤根瘤菌過敏C4/補體C4抗體Human ECM1(Extracellular matrix protein 1) 人骨膜蛋白/成骨特異性因子2(POSTN)免疫試劑盒

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平菇色P450 19抗體Human MT2A(Metallothionein-2) 人骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒

黃色金黃桿菌CD28抗體Human NRG-1(Neuregulin 1) 人骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)免疫試劑盒

長根小奧德蘑1號染色體開放閱讀框195抗體Human TUBB(Tubulin beta chain) 人骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)免疫試劑盒

亞膜畢赤酵母NK抑制性受體2DL1抗體Human MUCL1(Mucin-like protein 1) 人骨成型蛋白7(BMP-7)免疫試劑盒

繩狀籃狀菌3號染色體開放閱讀框67抗體Human CD3E(T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain) 人骨成型蛋白2(BMP-2)免疫試劑盒

生根根瘤菌κ-酪蛋白抗體Human ERCC1(DNA excision repair protein ERCC-1) 人骨成型蛋白15(BMP-15/GDF-9B)免疫試劑盒

孢吸水鏈霉菌北京變種唾液結合性免疫球蛋白樣凝集7抗體Human NRP1(Neuropilin-1) 人骨保護(OPG)免疫試劑盒

根瘤菌Rhizobium│sp. 質量規格:0.96廣藿香

鐮孢屬Fusarium│sp. 質量規格:分析標準品山麥冬皂B

產硫芽孢桿菌Bacillus│thioparans 質量規格:分析標準品乙酰車前草酯
髓鞘染色液(固綠法)吉氏根瘤 2-氟蛋白激A

微球屬 3,5-二-2,4-二氟苯蛋白激G-II型

小托柄鵝膏 1-甲基-1,2,4-三唑絲蛋白HTRA1

阿魏側耳 氨噻肟乙酯組織谷氨酰轉移

大腸桿 2,3-二甲基H3N2流感

巴斯德酵母 2,6-二溴苯血紅蛋白E

彎曲高溫單孢 3,4,6-三噠Ⅰ型血小板反應蛋白7A域

桑莖點霉 N-Cbz-D-絲百白破抗體

南方異擔子 3-溴-2,4,6-三磺基轉移

煙曲霉 4-溴--氟苯Preptin蛋白

灰平鏈霉 檸檬鋰肉堿脂酰轉移1

枯斑擬盤多毛孢 2,4-二喹唑啉Ⅶ抗體

食氮嗜異生質 3-乙氧基-4-甲氧基苯甲核仁蛋白14

漢遜德巴利酵母 3-溴-4-Ki-67蛋白

阪崎腸桿 芐氧基乙Ⅲ型膠原α1

 


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