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| 貨號 | FS-X9643 |
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產品介紹:
工作原理： 在機體內部隨時都在發生著細胞的死亡。傳統上用顯微鏡來觀察細胞的死亡，其特征為核染色質的濃縮及碎片的形成。但是這種現象出現的很晚，時間也很短暫。凋亡的特征是內源性核酸內切酶被激活，細胞自身的染色質或DNA被切割，出現單鏈或雙鏈缺口，并產生與 DNA 斷點數目相同的3’-OH末端。末端脫氧核糖核酸轉移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以將標記的dUTP(DIG-dUTP)標記至 3’-OH末端，DIG-dUTP結合在DNA斷點部位，可以通過生物標記的抗抗體(Anti-DIG-Biotin)反應后，再結合鏈酶親和素-過氧化物酶(SABC)，然后加入顯色底物DAB予以顯示。凋亡的細包核呈黃色，從而可以在顯微鏡下觀察到著色的凋亡細胞。 試劑盒內容： 1．標記緩沖液(Labeling Buffer)1ml 2．末端脫氧核糖核酸轉移酶(TdT,×20)20μl 3．DIG-dUTP(×20)20μl 4．封閉液(Blocking Reagent)4ml 5．生物su化抗抗體(× 100)20μl 6．SABC(× 100)20μl 7．Proteinase K(×200)50μl 8．抗體稀釋液 4ml 保存條件：-20℃冰凍保存。 保存期：一年 |
中文名稱：細胞凋亡檢測試劑盒I(POD)
英文名稱：
產品規格：20T
貨號：FS-X9643
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
血管內皮細胞蛋白C受體(PROCR)檢測試劑盒 forProteinCReceptor,Endothelial(PROCR)
異檸檬suan脫氫mei1(IDH1)檢測試劑盒 forIsocitrateDehydrogenase1,Soluble(IDH1)
Arkadia蛋白(ARK)檢測試劑盒 forArkadia(ARK)
白介su6受體(IL6R)檢測試劑盒 forInterleukin6Receptor(IL6R)
凋亡相關因子(FAS)檢測試劑盒 forFactorRelatedApoptosis(FAS)
jia胎蛋白(αFP)檢測試劑盒 forAlpha-Fetoprotein(aFP)
旁血小板溶蛋白(PPL)檢測試劑盒 forPeriplakin(PPL)
轉運蛋白2(TNPO2)檢測試劑盒 forTransportin2(TNPO2)
20S-蛋白mei體(20S-PSM)檢測試劑盒 for20S-Proteasome(20S-PSM)
白細胞免疫球蛋白樣受體亞家族A成員3(LILRA3)檢測試劑盒 forLeukocyteImmunoglobulinLikeReceptorSubfamilyA,Member3(LILRA3)
5-羥色an受體6(HTR6)檢測試劑盒 for5-HydroxytryptamineReceptor6(HTR6)
蛋白二硫化物異構meiA4(PDIA4)檢測試劑盒 forProteinDisulfideIsomeraseA4(PDIA4)
粘蛋白5AC(MUC5AC)檢測試劑盒 forMucin5SubtypeAC(MUC5AC)
載脂蛋白A4(APOA4)檢測試劑盒 forApolipoproteinA4(APOA4)
suan激mei(PK)檢測試劑盒 forPyruvateKinase,LiverAndRBC(PK)
基質金屬蛋白mei27(MMP27)檢測試劑盒 forMatrixMetalloproteinase27(MMP27)
細胞因子信號轉導抑制因子3(SOCS3)檢測試劑盒 forSuppressorsOfCytokineSignaling3(SOCS3)
細胞凋亡檢測試劑盒I(POD)氨jia環suan相關物質C標準品 規格:15mg 英文名稱：
紫杉chun標準品 規格:200mg 英文名稱：Paclitaxel
富馬suan噻吡二an標準品 規格:200mg 英文名稱：Methapyrilene Fumarate
妥布霉su標準品 規格:350mg 英文名稱：Tobramycin
睡茄交酯 A標準品 規格:15mg 英文名稱：Withanolide A
利相關物質A標準品 規格:15mg 英文名稱：
綠原suan標準品 規格:50mg 英文名稱：Chlorogenic Acid
鹽suan拉貝爾標準品 規格:200mg 英文名稱：Labetalol Hydrochloride
異fu烷相關物質A標準品 規格:0．1ml 英文名稱：
ben磺suan美索達嗪標準品 規格:250mg 英文名稱：Mesoridazine Besylate
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