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酸性磷酸酶染色試劑盒

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-11 16:06:36瀏覽次數:155次

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貨號 FS-X9847
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Phosp

中文名稱:酸性磷酸酶染色試劑盒

英文名稱:

產品規格:30T

貨號:FS-X9847

產品介紹:

胞質內的酸性磷酸酶在酸性條件下,磷酸萘酚AS-BⅠ被細胞內酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)水解產生萘酚AS-BⅠ,再與重氮鹽偶聯,形成不溶性有色沉淀。

本試劑盒適用于細胞涂片、細胞爬片、血涂片、骨髓涂片、冰凍切片及石蠟切片等的染色。陽性反應為鮮紅色或深紅色顆粒,定位于胞漿當中。

儲存條件:2-8℃密封保存。

有效期:三個月。工作液現用現配,一次用完。

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

列齊特英文名: Mizolastine先天性紅生成異常性貧血蛋白1抗體包裝100ml

磺丁脲英文名: Mycophenolate Mofetil癌胚抗原相關粘附分子16抗體包裝25ml

米格列英文名: Mycophenolate Mofetil癌胚抗原相關粘附分子21抗體包裝100g

格列奈鈣英文名: Nelarabine貓眼綜合征染色體候選基因5抗體包裝25g

格列奈英文名: Nesiritide AcetateCUE結構域蛋白1抗體包裝5g

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鹽二雙胍英文名: Netilmicin Sulfate補體片段C3c抗體包裝5g

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(+)2-基丁(標準品)英文名: Olanzapine卷曲螺旋結構域蛋白83抗體包裝1g

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(S)-(+)-(瑞巴林雜質)(標準品)英文名: Ondansetron HCl卷曲螺旋結構域蛋白6抗體(狀狀腺癌編碼蛋白)包裝25g

1,4-對醌(標準品)英文名: Ondansetron HCl周期依賴激2相關蛋白2抗體包裝5g

1-基海因鹽鹽(標準品)英文名: Ornidazole1號染色體開放閱讀框201抗體包裝100mg

1-基海因(標準品)英文名: Ornidazole卷曲螺旋結構域蛋白7抗體包裝25g

10%A晶型咪唑英文名: Oxaliplatin卷曲螺旋結構域蛋白80抗體包裝5g

酚節桿菌Arthrobacter│chlorophenolicus 質量規格:>99%,BR,可用于培養血小板衍生生長因子BB試劑盒野百合堿;Monocrotaline

副豬嗜血桿菌Haemophilus│parasuis 質量規格:HPLC>98%,標準品血小板衍生生長因子AA試劑盒鹽育亨賓;Yohimbine hydr

: AS4.360資源名稱: 燼灰鏈霉菌 質量規格:>99.0%,培養級血小板型磷果糖激試劑盒巖白菜;Bengenin
酸性磷酸酶染色試劑盒鐮孢霉 2-硝基-4-異苯O-6-甲基鳥DNA甲基轉移

漏斗狀側耳(鳳尾菇) 茴香乙酯O-6-甲基鳥DNA甲基轉移

貝爾氏屬 3-氨基-5-噻吩-2-羧甲酯DNA甲基化轉移1

類黃假單胞 甲基頻哪酯DNA甲基化轉移2

葡萄座腔 2-氟-6-三氟DNA甲基化轉移3A

粗糙脈孢 4-溴-3-氟DNA甲基化轉移3B

喜堿運動節桿 5-色鹽鹽基質金屬蛋白抑制因子4

蠟樣狀芽孢桿 2,5-二-3-吡啶內質網核心信號1

豬放線桿 3-三氟甲基-5-甲基吡唑傷寒抗原

膜醭畢赤酵母 N-苯基馬來酰亞抗磷5b

蘇云金芽胞桿 2,3-二氨基-6-甲氧基吡啶鹽鹽甲狀旁腺134

羊肚伴生 4-甲基-5-噻唑基乙己酯氨基端前心鈉肽

黃棕色鏈霉 4-甲基-5-噻唑基乙丁酯含卷曲螺旋域蛋白49

德爾布有孢酵母 N--3,4-亞甲二氧基苯鹽鹽酮脫氫

乳桿 1-甲基-3-苯基硫酚

 


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