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貨號	FS-X9851

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：巴氏染色試劑盒(EA36)

英文名稱：

產品規格：400ml

貨號：FS-X9851

產品介紹:

細胞中的細胞核是由酸性物質組成，它與堿性染料的親和力較強；而細胞漿則相反，它含有堿性物質和酸性染料的親和力較大。巴氏染色液利用這一特性對細胞進行多色性染色，細胞經染色后能清晰地顯示細胞的結構，胞質透亮鮮麗，各種顆粒分明，細胞核染色質非常清楚，從而較容易發現異常細胞。通過巴氏染色可反映出細胞在炎癥刺激下和癌變后的形態學變化，對早期發現和診斷一些病變和腫瘤具有較重要意義。

巴氏染色法是臨床細胞學檢查常用的傳統染色方法，在婦科檢查中，巴氏染色細胞學檢查是宮頸癌及癌前病變的較常用篩查方法。同時巴氏染色還可觀察女性激素水平和檢測生殖道病原體如念珠菌、滴蟲等的感染。其中EA50染液為EA36的改良型，其操作方法與EA36相同。一般認為，EA36和EA50 較適用于婦科標本，改良EA65染液較常用于非婦科標本(如胸、腹水等脫落細胞)。

儲存條件：室溫密封保存。

有效期：六個月。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

5-三基(標準品)英文名： Rifabutin CD83抗體包裝250mg

5-硝基糠二乙酯（標準品）英文名： Rifapentine17號染色體開放閱讀框59抗體包裝50MG

6-氧基-2-萘乙（標準品）英文名： Rifapentine17號染色體開放閱讀框39抗體包裝25g

6-硫鳥(標準品)英文名： Riluzole鈣敏感受體1抗體包裝5g

6-疏基（標準品）英文名： Riluzole鈣結合蛋白Calponin抗體包裝1g

7－基去乙酰氧基頭孢烷（7-ADCA）（標準品）英文名： Deferasirox2號染色體開放閱讀框44抗體包裝25ml

808猩紅（標準品）英文名： Deferasirox2號染色體開放閱讀框55抗體包裝5g

Acarbose(標準品)英文名： Risperidone2號染色體開放閱讀框57抗體包裝250mg

Acyclovir(標準品)英文名： Risperidone2號染色體開放閱讀框29抗體包裝25g

Adiphenine HCl(標準品)英文名： Ritonavir3號染色體開放閱讀框21抗體包裝5g

Allylestrenol(標準品)英文名： Ritonavir1號染色體開放閱讀框74抗體包裝1g

alpha-亞麻(標準品)英文名： Rosiglitazone base補體C1q和腫瘤壞死因子相關蛋白10抗體包裝5g

Altrenogest(標準品)英文名： Rosiglitazone base1號染色體開放閱讀框93抗體包裝100g

Amisulpride(標準品)英文名： Rosiglitazone Maleate 1號染色體開放閱讀框94抗體包裝25g

Anastrozole（標準品）英文名： Rosiglitazone Maleate 1號染色體開放閱讀框96抗體包裝500g

青霉屬Penicillium│sp. 質量規格：HPLC>99%,標準品血小板活化因子試劑盒羊藿;Icariin

黑曲霉Aspergillus│niger 質量規格：>99%,BR，培養級血小板反應蛋白/凝血敏感蛋白1試劑盒遠志;Polygalacic acid

不動桿菌Acinetobacter│sp. 質量規格：HPLC>98%,標準品血纖肽/纖維蛋白肽B試劑盒隱丹參;Cryptotanshinon
巴氏染色試劑盒(EA36)釀酒酵母 2--4-甲氧基嘧啶巨噬激蛋白

米根霉 2--5-甲基嘧啶加氧血紅-1

枯草芽孢桿枯草亞種 4,4-二氟庚二二乙酯21羥化

美澳型核果褐腐病鹽瓦地那非三水合物21羥化

亞拉巴馬全緣孔 3,3-二甲基哌-2-酮肺表面活性蛋白

腐皮殼 3,5-二

食腺芽生葡萄孢酵母 1-萘肼鹽鹽循環腫瘤

根瘤 3-氟-4-嗎啉基苯基異酯四環類

細鏈格孢 N-甲基-2-戊骨膜蛋白

黃赭色鏈霉 2-萘鹽鹽磷化信號轉導分子SMAD-3

大腸埃希氏磷化信號轉導分子SMAD-4

嘴突凸臍蠕孢 2-溴-3--5-硝基吡啶脫氧血紅蛋白

貝倫格葡萄座腔梨生專化型乙鉍(III) (metals basis)氧合血紅蛋白

黃綠木霉 6-溴-1,2,3,4-四氫喹啉二型高密度脂蛋白

不產色鏈霉 N-苯基氨基乙乙基三型高密度脂蛋白
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)