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貨號 | FS-X10092 |
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產品介紹:
用途: 磷脂染色 注意事項: 磷脂、神經髓鞘磷脂和核蛋白呈藍黑色,胞質呈灰黃色。 儲存條件:室溫,避光,12個月 |
中文名稱:磷脂染色液(酸性蘇木紅法)
英文名稱:
產品規格:4×100ml
貨號:FS-X10092
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
硫磺菌雙特異性蛋白磷10抗體Human STARD13 (StAR-related lipid transfer protein 13) 人白介8(IL-8/CXCL8)自身抗體免疫試劑盒
根瘤菌雙特異性蛋白磷5抗體Human STATH (Statherin) 人白介8(IL-8/CXCL8)免疫試劑盒
Leminorella richardii磷化動力蛋白1抗體Human CERK(Ceramide kinase) 人白介7(IL-7)免疫試劑盒
硝孢鏈霉菌動力蛋白1抗體Human SYNRG (Synergin gamma) 人白介6受體(IL-6R)免疫試劑盒
色串孢屬磷化動力蛋白1抗體Human SRD5A2 (3-oxo-5-alpha-steroid 4-dehydrogenase 2) 人白介6(IL-6)免疫試劑盒
噬尼古丁節桿菌腦啡肽A抗體Human SLBP (Histone RNA hairpin-binding protein) 人白介5受體alpha(IL5RA)免疫試劑盒
直立枝孢強直性肌營養不良相關蛋白9抗體Human SGPP2 (Sphingosine-1-phosphate phosphatase 2) 人白介5(IL-5)免疫試劑盒
釀酒酵母DYX1C1蛋白抗體Human SUCNR1 (Succinate receptor 1) 人白介4受體(IL4R/CD124)免疫試劑盒
柴油食烷菌E3泛蛋白連接dzip3抗體Human SRSF7 (Serine/arginine-rich splicing factor 7) 人白介4(IL-4)免疫試劑盒
蕈狀芽孢桿菌三磷腺依賴解旋DDX23抗體Human FCGRT(IgG receptor FcRn large subunit p51) 人白介37(IL-37)免疫試劑盒
茫崖諾卡氏菌多能發育相關基因5抗體Human SI (Sucrase-isomaltase, intestinal) 人白介35(IL-35)免疫試劑盒
泡盛曲霉三磷腺依賴解旋DDX3抗體Human SREK1 (Splicing regulatory glutamine/lysine-rich protein 1) 人白介33(IL-33)免疫試劑盒
假芽胞桿菌屬磷化三磷腺依賴解旋DDX3抗體Human GGT1(Gamma-glutamyltranspeptidase 1) 人白介32(IL-32)免疫試劑盒
廣島鏈霉菌迪格弗-梅爾基奧爾-克勞森綜合征相關蛋白抗體Human SULF1(Extracellular sulfatase Sulf-1) 人白介31(IL-31)免疫試劑盒
天目山類芽孢桿菌雙氧化激活因子2抗體Human SHFM1 (26S proteasome complex subunit DSS1) 人白介3(IL-3)免疫試劑盒
邊緣假單胞菌RNA結合泛連接DZIP3抗體Human SVIL (Supervillin) 人白介2誘導的T激(ITK)免疫試劑盒
鐮孢屬Fusarium│sp. 質量規格:500mg/L,溶劑:1%鹽山楂
蠟狀芽孢桿菌Bacillus│cereus 質量規格:100(20℃)µg/mL,基體: 1%HNO3棕矢車菊
球孢白僵菌Beauveria│bassiana 質量規格:1000μg/ml異芒果
磷脂染色液(酸性蘇木紅法)粉擬青霉 芴甲氧羰酰基正亮類粘蛋白
相思根瘤 硫鋇亞硫還原
大豆慢生根瘤 1--3-(三氟甲氧基)苯腺-5-磷酰硫還原
密旋鏈霉 3,5-二-4-氟三氟甲苯氧乙酰絲 (硫)裂解
黃桿 4-苯基ATP硫化
賴芽胞桿屬 FMOC-肌可溶性淀粉合成
嗜鹽四聯球 1-金剛烷甲磷脂C
谷棒狀桿(黃色短桿)* 三化鈦(III)溶液磷脂D
大腸埃希 章鹽鹽胰高血糖
福山假絲酵母 溴化鋅蕪菁花葉病
鴨疫里氏桿 D-3-(2-萘基)-甘油三磷脫氫
橙色桿狀 4-溴-3-甲酰基合成
褐球固氮* 2,3,5,6-四氟二酰基甘油酰基轉移
埃切畢赤酵母 Boc-3-(1-萘基)-D-馬鈴薯病X
球孢白僵 3-基-4,6-二甲基-2-羥基吡啶二磷腺
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