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貨號 | FS-X9748 |
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產品介紹:
淋巴細胞分離液(Lymphocyte Separation Medium 1.084,簡稱LSM-1.084)是一種無菌的即用型分離液,基于B?yum的Ficoll-甲泛影鈉溶液做過一些改良,使得操作簡單快速且分離效率更高。本品是無菌的聚蔗糖Ficoll/泛影鈉混合溶液,密度為1.084 g/ml,內毒素含量很低(<0.12 EU/ml),是在嚴格控制的環境下加工的,條件符合ISO13485:2003標準和GMP認證。相對于密度為1.077 g/ml的人淋巴細胞分離液,本品適用于分離更高密度的人單個核細胞,包括外周血,臍帶血以及骨髓瘤來源的組織樣本。還適用于分離大小鼠血細胞,正因為嚙齒動物的淋巴細胞密度稍高于人淋巴細胞。 工作原理 去纖維蛋白或抗凝人血以1:1的比例用無菌生理鹽水或平衡鹽溶稀釋,小心的添加在分離液上層(不要混雜在一起),之后離心30-40min。離心過程中,差速遷移使其終形成幾個不同的細胞分層: ①聚集在管底的顆粒主要是Ficoll 聚集的紅細胞以及沉淀物; ②緊挨著上面一層的顆粒主要是粒細胞,其處于LSM-1.084溶液的滲透壓臨界,具有足夠高的密度遷移穿過LSM-1.084溶液層。 ③單個核細胞分布在血漿和LSM-1.084分離液的中間層,還包括一些沉降系數低(密度低)的顆粒,如血小板。 淋巴細胞,單核細胞和血小板不具有足夠高的密度穿透LSM-1.084分離液層,因此這些細胞在血漿和LSM-1.084分離液層聚集形成一個中間分層。吸取中間層,用平衡鹽溶短暫洗滌,以除去血小板,細胞分離介質和血漿,就可以單個核細胞。通常情況下,分離所得的細胞中95±5%為單個核細胞,細胞存活率>90%,回收率為60±20%。 儲存條件:4~8℃,避光 |
中文名稱:淋巴細胞分離液1.084
英文名稱:Lymphocyte separation medium1.084
產品規格:100ml
貨號:FS-X9748
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
組織金屬蛋白抑制因子2(TIMP2)英文名:TIMP2 磷化Bax抗體包裝250mg
組織金屬蛋白抑制因子1(TIMP1)英文名:TIMP1 磷化癌抗雌激耐藥蛋白1抗體包裝25ml
組織蛋白Z(CTSZ)英文名:CTSZ 磷化癌抗雌激耐藥蛋白1抗體包裝5ml
組織蛋白S(CTSS)英文名:CTSS 磷化癌抗雌激耐藥蛋白1抗體包裝1g
組織蛋白L(CTSL)英文名:CTSL 磷化相關死亡促進因子抗體包裝5g
組織蛋白K(CTSK)英文名:CTSK 肌動蛋白樣蛋白6A抗體包裝100g
組織蛋白G(CTSG)英文名:CTSG 磷化紅陰離子交換蛋白1抗體包裝25g
組織蛋白D(CTSD)英文名:CTSD 磷化紅陰離子交換蛋白1抗體包裝5g
組織蛋白A(CTSA)英文名:CTSA 障礙自整合蛋白BAF抗體包裝200mg
組蛋白脫乙酰基4(HDAC4)英文名:HDAC4 磷化轉錄因子MYB相關蛋白B抗體包裝1g
組蛋白脫乙酰基2(HDAC2)英文名:HDAC2 磷化轉錄因子MYB相關蛋白B抗體包裝1g
組蛋白脫乙酰基1(HDAC1)英文名:HDAC1 磷化B-Raf抗體包裝250mg
組蛋白H4(H4)英文名:H4 磷化B-Raf抗體包裝1g
組蛋白H3(H3)英文名:H3 磷化B-Raf抗體包裝5g
組蛋白H2B(H2B)英文名:H2B 磷化B-Raf抗體包裝1g
二磷腺核糖基化因子6相互作用蛋白抗體干擾α14(IFNα14)MK 2206 dihydrochloride 是一種口服有效的 Akt 變構抑制劑,抑制 Akt1/Akt2/Akt3 的 IC50 分別為 5 nM/12
淋巴細胞分離液1.084產氣莢膜梭 D型 2--5-甲基噻吩前列腺特異膜抗原
泡盛曲霉 4-戊基前列腺特異性抗原
磚紅鐮孢 2,6-二羥乙氨苯前梯度蛋白2
猴假單胞 環丁烷甲乙酯前心鈉肽
毛柄(金針菇) 4-磺酰苯潛伏膜蛋白1
阿魏側耳 4--4-氧代丁甲酯強啡肽
大豆慢生根瘤 AMP鈉鹽羥賴
牡丹擬盤多毛孢 beta-紫羅蘭酮羥脯
黑曲霉 1,2,3-三氟苯橋粒芯蛋白3
植物乳桿 N-乙基-N-乙基苯橋粒芯糖蛋白-1
谷棒桿 5--2-橋粒芯糖蛋白-3
大腸埃希氏 N-Boc-3-甲甲酯鞘磷脂
凍干粉 產腸大腸埃希氏(陽性) N-乙基-N-乙基間甲苯切除修復交叉互補基因1
光滑青霉 丁葉酯
金針菇 2,6-二-3-吡啶清道夫受體B
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