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貨號 | FS-X9713 |
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英文名稱:
產品規格:500T|1000T
貨號:FS-X9713
產品介紹:
綠色熒光細胞活性檢測試劑盒是采用一種可對活細胞進行熒光標記的細胞染色試劑,檢測細胞增殖情況。當熒光染色試劑其進入到細胞質后,酯酶會將其水解并留在細胞內,發出強綠色熒光,它的細胞毒性很低,不會抑制任何的細胞功能如增殖或淋巴球的趨化性。 儲存條件:-20℃避光保存。 有效期:一年。 |
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
骨粘連蛋白(ON)英文名:ON β淀粉樣肽(1-28)抗體包裝5g
骨形成蛋白6(BMP-6)英文名:BMP-6 有絲分裂激B抗體包裝5g
骨形成蛋白(BMPs)英文名:BMPs 軟骨蛋白聚糖抗體包裝25g
骨涎蛋白(BSP)英文名:BSP 去整合樣金屬蛋白10抗體包裝5g
骨退化特異標志物(CTX-2)英文名:CTX-2 含錨蛋白重復序列-因子信號抑制物盒蛋白家族9抗體包裝100mg
骨特異性堿性磷B(ALP-B)英文名:ALP-B 含錨蛋白重復序列-因子信號抑制物盒蛋白家族8抗體包裝1ml
骨特性堿性磷(BALP)英文名:BALP 植物生長激ABP1抗體包裝25ml
骨橋(OPN)英文名:OPN 肌動蛋白相關蛋白1抗體包裝5ml
骨膠原交聯(Cr)英文名:Cr α紅分化相關因子抗體包裝1g
骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)英文名:OT/BGP 血管緊張激活蛋白1抗體包裝5g
骨鈣(OT)英文名:OT Alpha清蛋白抗體包裝1g
骨鈣(BGP)英文名:BGP AFAP1L2抗體包裝1g
骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)英文名:BMPR-Ⅱ 神經分化相關蛋白AHNAK抗體包裝5MG
骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)英文名:BMPR-1A 粘合連接相關蛋白1抗體包裝1g
骨成型蛋白9(BMP-9)英文名:BMP-9 去整合樣金屬蛋白13抗體包裝5g
脊髓小腦共濟失調2型蛋白抗體轉鐵蛋白(TRF)Fluticasone Propionate is a synthetic glucocorticoid, used to treat non-allergic
Calcein AM細胞增殖與毒性檢測試劑盒新疆溶桿 2-氨基異丁酸乙酯鹽酸鹽谷氧還蛋白1
黑木耳 2-基苯基酸1,3-酯谷氧還蛋白2
擬青霉 福沙吡坦骨保護
堅強芽孢桿 5-甲氧基-1H--3-甲酸甲酯骨成型蛋白2
皺環球蓋菇 1-N-Cbz-4-N-(Boc-氨甲基)骨成型蛋白4
米蘭鏈霉 3-氨基-2-基-6-溴吡骨成型蛋白6
規則東方喜鹽 芐基-2-乙骨成型蛋白7
枯草芽孢桿 3-溴-5-(三氟甲基)芐骨成型蛋白受體2
白酒 鉛 2-氨基-4,6-二-5-甲酰基嘧啶骨鈣
釀酒酵母 道古霉骨堿性磷酸
玫瑰淡紫鏈霉 對羥基乙酯骨堿性磷酸
黑色淺灰鏈霉 PD158780骨橋蛋白抗體(分泌型磷蛋白1)
弗吉尼亞鏈霉 2,4-二甲基吡咯-3-羧酸骨橋蛋白抗體(分泌型磷蛋白1)
鐮刀 4-溴-3-甲氧基甲酯骨橋
根瘤 (4-溴-2-基)甲骨特異性堿性磷酸
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