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MTT細胞增值與毒性檢測試劑盒

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-09 13:44:33瀏覽次數:140次

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貨號 FS-X9676
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ACE2 ACE2抗體4-雄烯-11β--3,17-二酮
ACEI 血管緊張1轉換抑制劑抗體2,2-雙[4-(

中文名稱:MTT細胞增值與毒性檢測試劑盒

英文名稱:MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit

產品規格:500T

貨號:FS-X9676

產品介紹:

MTT可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成結晶狀的深紫色產物formazan,在特定溶劑存在的情況下,可以被*溶解,然后通過酶標儀可以測定490nm波長附近的吸光度。細胞增殖越多越快,則吸光度越高;細胞毒性越大,則吸光度越低。

使用說明:

1.收集對數期細胞,調整細胞懸液濃度,分于96孔板,每孔180μL,3000-10000個細胞/孔。

2.置37℃、5%CO2溫箱培養使細胞貼壁,培養6-24小時。

3.加入適當濃度的受試化合物,繼續培養適當時間。

4.小心吸去上清,加入90μL新鮮培養液,再加入10μL MTT溶液,繼續培養4 h。

5.然后吸掉上清,每孔加入110μL Formazan溶解液,置搖床上低速振蕩10 min,使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀490 nm處測量各孔的吸光值。

6.同時設置調零孔(培養基、MTT、 Formazan溶解液),對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養液、MTT、 Formazan溶解液),每組設定3復孔。

儲存條件:-20℃

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

胰島原(PI)英文名:PI 磷化系統性紅斑狼瘡先關蛋白TREX1抗體包裝1g

胰島樣生長因子結合蛋白6(IGFBP-6)英文名:IGFBP-6 磷化系統性紅斑狼瘡相關蛋白TREX1抗體包裝1g

胰島樣生長因子結合蛋白4(IGFBP-4)英文名:IGFBP-4 接頭相關蛋白復合體AP-2μ鏈1抗體包裝25g

胰島樣生長因子結合蛋白2(IGFBP-2)英文名:IGFBP-2 磷化接頭相關蛋白復合體AP-2μ鏈1抗體包裝5g

胰島樣生長因子結合蛋白1(IGFBP-1)英文名:IGFBP-1 膜粘連蛋白7抗體包裝100g

胰島樣生長因子2(IGF-2)英文名:IGF-2 3號染色體開放閱讀框15抗體包裝500g

胰島樣生長因子1受體(IGF-1R)英文名:IGF-1R 載脂蛋白B受體抗體包裝25g

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胰島受體β(ISR-β)英文名:ISR-β 載脂蛋白B抗體包裝1g

胰島降解(IDE)英文名:IDE 花生四烯15脂氧合2抗體包裝25g

胰島(INS)英文名:INS 載脂蛋白C4抗體包裝5g

原激活肽(TAP)英文名:TAP 低密度脂蛋白受體銜接蛋白抗體包裝1g

1(trypsin-1)英文名:trypsin-1 原始廣泛存在蛋白1抗體包裝250mg

(trypsin)英文名:trypsin 錨蛋白重復結構域蛋白37抗體包裝5g

α淀粉(AMY2A)英文名:AMY2A α1,4-半乳糖基轉移1包裝25g

激活受體2B抗體程序性死亡蛋白1配體1(PDCD1LG1)Rucaparib phosphate (AG-014699 phosphate) 是一種有效、可口服的 PARP 抑制劑,結合 PARP1 的Ki 為 1.4
MTT細胞增值與毒性檢測試劑盒枯草芽胞桿 京尼平CD14分子

耐熱拉錢斯氏酵母 柚皮CD163分子

長枝木霉 酚CD20分子

細小不動桿 2,4-二苯甲CD28分子

凍土毛霉 梔子苷CD30分子

枯草芽孢桿 D-(-)-赤蘚糖CD38分子

新城疫病 大豆低聚糖CD3分子

醋酸鈣不動桿 低聚乳CD40分子

高溫放線 化汞CD40配體

枯草芽孢桿 4-基-α-D-吡喃鼠李糖苷CD44變體6

短桿屬 金雀花堿CD44分子

冬蟲夏草 絞股藍皂苷CD4分子

釀酒酵母 黃芪甲苷CD8分子

繡球* 槐果堿CD蛋白(損壞性關節炎)

大腸桿 5-甲基-2-氨基-3-硝基吡啶CIP2A

 


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