大主宰天蚕土豆,好看的玄幻小说,古风小说

貨號	FS-X9681

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：支原體檢測試劑盒

英文名稱：Mycoplasma Detection Kit

產(chǎn)品規(guī)格：100T-200T

貨號：FS-X9681

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒是利用熒光染料檢測支原體污染。這種染料會結合到DNA的A-T富集區(qū)域，因為支原體的DNA中A-T含量高(55％～80％)，所以可將其染色而被檢測到。被支原體污染的細胞經(jīng)染色后在細胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點，即為支原體的DNA染色斑，說明有支原體污染。Hoechst 33258的大激發(fā)波長為346nm，大發(fā)射波長為460nm;Hoechst 33258和雙鏈DNA結合后，大激發(fā)波長為352nm，大發(fā)射波長為461nm。

操作步驟：

貼壁細胞：

1.被檢細胞接種于無菌的6孔細胞培養(yǎng)板中，接種密度為1-2×104。同時，接種正常無支原體感染的同種細胞，作為陰性對照。

2.5天后，先吸去培養(yǎng)液，再加入1ml的固定液，靜置20min，

3.吸去固定液，晾干。

4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細胞)，37℃避光放置15-20min或室溫靜置20～30min。

5.吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml滅菌超純水洗滌三次，直接風干。風干后加入一滴封片液，并以蓋玻片覆蓋。

6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。

懸浮細胞：

1.收集需檢測的細胞，1500rpm，5min。

2.將收集的細胞涂片于載玻片上，再加1ml的固定液，靜置20min。

3.吸去固定液，晾干。

4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細胞)，37℃避光放置15～20min或室溫靜置20～30min。

5.吸去Hoechst 33258工作液，用無菌水洗滌玻片3次，直接風干。風干后加入一滴封固液，并以蓋玻片覆蓋。

6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

血管緊張轉化2(ACE2)英文名：ACE2 芳香烴受體抗體包裝5g

血管緊張轉化(ACE)英文名：ACE 吸引抗體包裝1g

血管緊張原(aGT)英文名：aGT 腺苷三磷結合盒轉運體A1抗體包裝5g

血管緊張Ⅱ受體2(AT2R)英文名：AT2R 蛋白激B2包裝1g

血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)英文名：ANG-Ⅱ 血管生成2抗體包裝25g

血管緊張Ⅰ(Ang-Ⅰ)英文名：Ang-Ⅰ 芳香化/色P450/雌激合成抗體包裝5g

血管緊張1-7(Ang1-7)英文名：Ang1-7 腺苷A2A受體抗體包裝1g

血管活性腸肽(VIP)英文名：VIP 蛋白激A錨定蛋白95抗體包裝25g

溴脫氧核苷(BrdU)英文名：BrdU 頂膜鈉依賴性膽鹽轉運體蛋白抗體包裝5g

雄烯二(ASD)英文名：ASD 去整合樣金屬蛋白8抗體包裝10MG

雄激受體(AR)英文名：AR 芳香乙酰脫乙?；鶚拥鞍?抗體包裝50MG

性激結合球蛋白(SHBG)英文名：SHBG ACN9蛋白抗體包裝250mg

信號轉導分子7(Smad7)英文名：Smad7 雙鏈RNA腺苷脫基抗體（N端）包裝50MG

信號轉導分子1(Smad1)英文名：Smad1 腺苷單磷活化蛋白激α2抗體包裝5g

新生狀腺(NN-T4)英文名：NN-T4 腺苷激抗體包裝25mg

肌動蛋白結合蛋白DOC6抗體白介4(IL4)Pritelivir (BAY 57-1293) is a potent helicase primase inhibitor, exhibiting anti
支原體檢測試劑盒佩特曲霉環(huán)磺酰MEK激

膠孢 2-乙基吡MEST

美麗短芽孢桿 1-萘酸microRNA-210

奇異球反式-鄰溴肉桂Spondin-2；mindin

根瘤 1-溴-3,4,5-三氟苯MRP-14

紅曲紅曲 4-溴-3-甲基吡唑腎上腺髓質前體中段肽

短桿狀馬賽 4-甲酸叔丁酯MxA蛋白

傘枝犁頭霉 2,5-二溴對苯二甲酸NADH-色b5還原

摩洛哥芽孢桿 4--6-乙基-5-氟嘧啶Na-K-ATP

囊孔附毛 L-(+)-扁桃酸乙酯nectin-4

膠孢環(huán)己基雙苯膦氧化物NOD樣受體1

黑曲霉 N,N'-(4,4'-亞甲基二苯基)雙馬來酰亞NOD樣受體-2

*蟲擬蠟鄰甲基三氟甲苯跨膜受體蛋白Notch-1

瓦克青霉二丁基二硫代氨酸鋅N端前腦鈉

印度不動桿 2,4,5-基噻唑N端中段骨鈣
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)