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貨號	FS-X9681

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：支原體檢測試劑盒

英文名稱：Mycoplasma Detection Kit

產品規格：100T-200T

貨號：FS-X9681

產品介紹:

本試劑盒是利用熒光染料檢測支原體污染。這種染料會結合到DNA的A-T富集區域，因為支原體的DNA中A-T含量高(55％～80％)，所以可將其染色而被檢測到。被支原體污染的細胞經染色后在細胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點，即為支原體的DNA染色斑，說明有支原體污染。Hoechst 33258的大激發波長為346nm，大發射波長為460nm;Hoechst 33258和雙鏈DNA結合后，大激發波長為352nm，大發射波長為461nm。

操作步驟：

貼壁細胞：

1.被檢細胞接種于無菌的6孔細胞培養板中，接種密度為1-2×104。同時，接種正常無支原體感染的同種細胞，作為陰性對照。

2.5天后，先吸去培養液，再加入1ml的固定液，靜置20min，

3.吸去固定液，晾干。

4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細胞)，37℃避光放置15-20min或室溫靜置20～30min。

5.吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml滅菌超純水洗滌三次，直接風干。風干后加入一滴封片液，并以蓋玻片覆蓋。

6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發光激發，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。

懸浮細胞：

1.收集需檢測的細胞，1500rpm，5min。

2.將收集的細胞涂片于載玻片上，再加1ml的固定液，靜置20min。

3.吸去固定液，晾干。

4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細胞)，37℃避光放置15～20min或室溫靜置20～30min。

5.吸去Hoechst 33258工作液，用無菌水洗滌玻片3次，直接風干。風干后加入一滴封固液，并以蓋玻片覆蓋。

6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發光激發，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

血管緊張轉化2(ACE2)英文名：ACE2 芳香烴受體抗體包裝5g

血管緊張轉化(ACE)英文名：ACE 吸引抗體包裝1g

血管緊張原(aGT)英文名：aGT 腺苷三磷結合盒轉運體A1抗體包裝5g

血管緊張Ⅱ受體2(AT2R)英文名：AT2R 蛋白激B2包裝1g

血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)英文名：ANG-Ⅱ 血管生成2抗體包裝25g

血管緊張Ⅰ(Ang-Ⅰ)英文名：Ang-Ⅰ 芳香化/色P450/雌激合成抗體包裝5g

血管緊張1-7(Ang1-7)英文名：Ang1-7 腺苷A2A受體抗體包裝1g

血管活性腸肽(VIP)英文名：VIP 蛋白激A錨定蛋白95抗體包裝25g

溴脫氧核苷(BrdU)英文名：BrdU 頂膜鈉依賴性膽鹽轉運體蛋白抗體包裝5g

雄烯二(ASD)英文名：ASD 去整合樣金屬蛋白8抗體包裝10MG

雄激受體(AR)英文名：AR 芳香乙酰脫乙酰基樣蛋白3抗體包裝50MG

性激結合球蛋白(SHBG)英文名：SHBG ACN9蛋白抗體包裝250mg

信號轉導分子7(Smad7)英文名：Smad7 雙鏈RNA腺苷脫基抗體（N端）包裝50MG

信號轉導分子1(Smad1)英文名：Smad1 腺苷單磷活化蛋白激α2抗體包裝5g

新生狀腺(NN-T4)英文名：NN-T4 腺苷激抗體包裝25mg

肌動蛋白結合蛋白DOC6抗體白介4(IL4)Pritelivir (BAY 57-1293) is a potent helicase primase inhibitor, exhibiting anti
支原體檢測試劑盒佩特曲霉環磺酰MEK激

膠孢 2-乙基吡MEST

美麗短芽孢桿 1-萘酸microRNA-210

奇異球反式-鄰溴肉桂Spondin-2；mindin

根瘤 1-溴-3,4,5-三氟苯MRP-14

紅曲紅曲 4-溴-3-甲基吡唑腎上腺髓質前體中段肽

短桿狀馬賽 4-甲酸叔丁酯MxA蛋白

傘枝犁頭霉 2,5-二溴對苯二甲酸NADH-色b5還原

摩洛哥芽孢桿 4--6-乙基-5-氟嘧啶Na-K-ATP

囊孔附毛 L-(+)-扁桃酸乙酯nectin-4

膠孢環己基雙苯膦氧化物NOD樣受體1

黑曲霉 N,N'-(4,4'-亞甲基二苯基)雙馬來酰亞NOD樣受體-2

*蟲擬蠟鄰甲基三氟甲苯跨膜受體蛋白Notch-1

瓦克青霉二丁基二硫代氨酸鋅N端前腦鈉

印度不動桿 2,4,5-基噻唑N端中段骨鈣
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)