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貨號	FS-X10100

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：Gram-Twort革蘭染色液

英文名稱：

產品規格：4×100ml

貨號：FS-X10100

產品介紹:

用途：

組織切片的革蘭氏細菌染色

注意事項：

Gram-Twort革蘭染色液采用非經典的革蘭染色配方，用到紅色和綠色染料，使色彩較為豐富，背景干凈，胞核胞質對比強烈，細菌染色特征典型，多用于組織切片的染色。

儲存條件：室溫，避光，12個月

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

Pseudoxanthomonas動力蛋白激活蛋白6抗體Human RERGL (Ras-related and estrogen-regulated growth inhibitor-like protein) 人α-黑色激(α-MSH)免疫試劑盒

絨奧德蘑脫2抗體Human RASSF1 (Ras association domain-containing protein 1) 人αS轉移(α-GST)免疫試劑盒

斑點青霉磷化DNA依賴性蛋白激抗體Human RHEBL1 (GTPase RhebL1) 人α干擾(IFN-α)免疫試劑盒

耐寒短桿菌防御α4抗體Human R3HCC1 (R3H and coiled-coil domain-containing protein 1) 人α-輔肌動蛋白4(ACTN-4)免疫試劑盒

圈卷產色鏈霉菌DNA損傷結合蛋白1抗體Human SPDEF (SAM pointed domain-containing Ets transcription factor) 人α-輔肌動蛋白3(ACTN-3)免疫試劑盒

炭疽健康皮張抗原DNA損傷結合蛋白2抗體Human RTBDN (Retbindin) 人α-輔肌動蛋白1(ACTN-1)免疫試劑盒

凝結芽胞桿菌CD299抗體Human PEAK1 (Pseudopodium-enriched atypical kinase 1) 人α-防御4(NP-4)免疫試劑盒

巨大芽孢桿菌C型凝集結構域家族4成員A抗體Human R3HDML (Peptidase inhibitor R3HDML) 人α淀粉(AMY1)免疫試劑盒

雅致放射毛霉C型凝集結構域家族6成員A抗體Human PTK2B (Protein-tyrosine kinase 2-beta) 人α半乳糖基(α-Gal)免疫試劑盒

解淀粉芽孢桿菌B淋巴銜接分子DAPP1抗體Human RABGAP1 (Rab GTPase-activating protein 1) 人α半乳糖(αGAL)免疫試劑盒

微小根毛霉DNA1樣蛋白1抗體Human PINK1(Serine/threonine-protein kinase PINK1, mitochondrial) 人αN已?；咸?αNAG)免疫試劑盒

根瘤菌抗菌蛋白DCD抗體Human PURB (Transcriptional activator protein Pur-beta) 人αL巖藻糖(AFU)免疫試劑盒

畢赤酵母肌動蛋白解聚因子抗體Human REP15 (Rab15 effector protein) 人αL艾杜糖(IDUA)免疫試劑盒

斯瓦特貝赫山克里布所菌甘油二酯?；D移2抗體Human RABIF (Guanine nucleotide exchange factor MSS4) 人α2抗纖溶(α2-AP)免疫試劑盒

中國臺灣根霉DHX15蛋白抗體Human PURG (Purine-rich element-binding protein gamma) 人α2巨球蛋白(α2-MG)免疫試劑盒

頂孢頭孢霉DIAPH2蛋白抗體Human RALGPS1 (Ras-specific guanine nucleotide-releasing factor RalGPS1) 人α2-HS糖蛋白(AHSG)抗體免疫試劑盒

大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質量規格：100μg/mL，基體:1%HNO3谷單鈉鹽

除烴海桿菌Marinobacter│hydrocarbonoclasticus 質量規格：500mg/L,溶劑：鵝去氧膽

日本慢生根瘤菌Bradyrhizobium│japonicum 質量規格：1000µg/mL,基體:1%HCl去氧膽鈉
Gram-Twort革蘭染色液病臭腸球絲氨鹽鹽色合成

薄花邊傘2-4 4-溴-2-甲氧基羧肽

玉大斑病甘氨酰-L-絲植

蟲形珊瑚三乙三氫氟鹽過氧化氫

熒光假單胞奧拉唑精合成

枯草芽胞桿枯草亞種 4-溴-2-吡啶精脫羧

Candidatus Rhizobium 4-(3-基)嗎啉鳥脫羧

節桿辛銠(II)二聚體S-腺蛋脫羧

動物雙歧桿 1-甘露糖野尻霉鹽鹽磷糖異構

大腸埃希氏反式-2,3-二甲氧基肉桂ω-3脂肪脫氫

大腸埃希氏桿反式2-溴肉桂核糖體蛋白S9

隆氏針層孔異辛硫核糖體

深紅酵母乙肼蘆丁降解

堿線屬 (S)-(-)-β-羥基-蘆丁降解

薄層 2-溴-5-吡啶5-烯式酮酰莽草-3-磷合
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)