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貨號	FS-X9753

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：膠原酶III型

英文名稱：Collagenase III

產品規格：100mg

貨號：FS-X9753

產品介紹:

本品為III型膠原酶，≥100 U/mg solid，常用于乳腺細胞和胎兒細胞的制備。

本品來源于溶組織梭菌（Clostridium histolyticum），是一種酶粗提物，不僅含有膠原酶（更準確的稱法為梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能夠降解天然膠原和網狀纖維。還含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分別能夠有效水解結締組織和上皮組織細胞外基質內的其他蛋白，多糖和脂質，使得本品非常適用于組織消化。

膠原酶（Collagenase）是一種蛋白酶，一種肽鏈內切酶，能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列（該序列高頻率出現在膠原中，很少發現于其他蛋白中）并切割該序列中性氨基酸（X）和甘氨（Gly）之間的肽鍵。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽，但膠原酶是一種可以降解具有三股超螺旋結構的天然膠原纖維的蛋白酶，這種膠原纖維廣泛存在結締組織內。

目前商業化提供的細菌膠原酶主要根據膠原酶活性的差異，分為四種類型：膠原酶I型，II型，III型和IV型，在應用上有所偏向：

1）膠原酶I（Type I Collagenase）：含有比較均勻的各種酶活力（包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白活性）。通常用作上皮細胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細胞的制備；

2）膠原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心臟、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織來源細胞的制備；

3）膠原酶III（Type III Collagenase）：含有較低的蛋白酶活性，常用于乳腺細胞的制備；

4）膠原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低活性，通常用于胰島細胞的制備，或者需要維持受體完整性的細胞制備實驗。

分子量：68-130 kDa

激活劑：Ca2+、Zn2+

抑制劑：EDTA, EGTA,Cysteine, histidine, 2-mercaptoethanol, o-phenanthroline DTT, Hg2+, Pb2+, Cd2+, Cu2+, Zn2+, Not inhibited by DFP or serum

活力單位：在37℃，pH7.5 的條件下，5h內水解膠原產生相當于1μM L-亮氨的酶量定義為1個酶活力單位。

儲存條件：4℃避光，有效期兩年

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

著絲粒蛋白H(CENPH)英文名：CENPH 癌相關蛋白2抗體包裝100g

粘蛋白5B(MUC5B)英文名：MUC5B 癌抗雌激耐藥蛋白1包裝25g

粘蛋白5AC(MUC5AC)英文名：MUC5AC 胞漿支鏈基轉抗體包裝500g

粘蛋白4(MUC4)英文名：MUC4 磷化癌抗雌激耐藥蛋白1抗體包裝1g

粘蛋白2(MUC2)英文名：MUC2 促凋亡調節蛋白BNIP3抗體包裝250mg

粘蛋白1(MUC1)英文名：MUC1 骨形態發生蛋白2受體抗體包裝5g

早期生長應答因子4(EGR4)英文名：EGR4 狀腺激受體共激活蛋白抗體包裝1g

早期生長應答因子2(EGR2)英文名：EGR2 磷化促凋亡Bik蛋白抗體包裝100mg

早期生長應答因子1(EGR1)英文名：EGR1 蛋白酪激BAP135抗體包裝1g

再生胰島衍生蛋白3γ(REG3γ)英文名：REG3γ 磷化相關死亡促進因子抗體包裝5g

再生胰島衍生蛋白3α(REG3α)英文名：REG3α 磷化Bax抗體包裝1g

再生胰島衍生蛋白1β(REG1β)英文名：REG1β Bcl-10抗體包裝25g

載脂蛋白H(APOH)英文名：APOH 原癌基因Bcl-6抗體包裝5g

載脂蛋白F(APOF)英文名：APOF 磷化Bcl-10抗體包裝100g

載脂蛋白E(APOE)英文名：APOE 磷化死亡調解子抗體包裝25g

整合樣金屬蛋白與凝血樣2蛋白抗體肌肉生長抑制(MSTN)PRT-060318 (PRT318)是新穎選擇性的酪激 (Syk) 抑制劑， IC50值為4 nM。
膠原酶III型蟹枝毛殼 5,6,7,8-四氫-8-羥基喹啉上皮黏附分子

矮小傘枝霉 4--3-神經

蘇云金芽胞桿多窩亞種 5-甲基尿甙神經膠質纖維性蛋白

陰溝腸桿 4'-溴-2,2,2-三氟苯乙酮神經節脂M3抗體

埋藏曲霉 1-乙基環戊神經生長導向因子

異常漢遜酵母 (3AR,7AS)-REL-八氫-1H-異鹽鹽神經生長因子

泛枝芽孢桿 3--2-羧神經絲蛋白

野蘑菇二甲硫烷神經損傷誘導蛋白1

多根硬皮馬勃月桂鋰神經肽A

相思根瘤埃索美拉唑鈉神經肽B

乳桿屬 4,4-二甲氧基丁神經肽Y

枯草芽胞桿 2,3,4-三氟苯甲神經調節蛋白1

豬輪狀病 3-(三氟乙酰基)神經粘附分子1

谷棒桿 1-N-Cbz-4-基神經酰

釀酒酵母甲磺己酯神經型一氧化氮合成
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)