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膠原酶IV型

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-11 14:33:05瀏覽次數:272次

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貨號 FS-X9754
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操作步驟:

1、貼壁細胞的消化

①吸除培養液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。

②加入少量Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。

③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變

化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的  *細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實驗。

④如果發現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落, 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實驗。

2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。

產品屬性:

產品名稱

英文名稱

產品規格

產品貨號

膠原酶IV型

Collagenase IV

100mg

FS-X9754

 

產品介紹:

本品為IV型膠原酶,≥125 CDU/mg solid(CDU = collagen digestion units),特別適用于胰島組織的消化。

本品來源于溶組織梭菌(Clostridium histolyticum),是一種酶粗提物,不僅含有膠原酶(更準確的稱法為梭菌蛋白酶A(clostridiopeptidase A)),能夠降解天然膠原和網狀纖維。還含有其他的一些蛋白酶,多糖酶,脂酶等,分別能夠有效水解結締組織和上皮組織細胞外基質內的其他蛋白、多糖和脂質,使得本品非常適用于組織消化。

膠原酶(Collagenase)是一種蛋白酶,一種肽鏈內切酶,能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列(該序列高頻率出現在膠原中,很少發現于其他蛋白中)并切割該序列中性氨基酸(X)和甘氨(Gly)之間的肽鍵。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽,但膠原酶是一種可以降解具有三股超螺旋結構的天然膠原纖維的蛋白酶,這種膠原纖維廣泛存在結締組織內。

目前商業化提供的細菌膠原酶主要根據膠原酶活性的差異,分為四種類型:膠原酶I型,II型,III型和IV型,在應用上有所偏向:

1)膠原酶I(Type I Collagenase):含有比較均勻的各種酶活力(包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白活性)。通常用作上皮細胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細胞的制備;

2)膠原酶II(Type II Collagenase):含有更高的梭菌蛋白酶活性,通常用于心臟、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織來源細胞的制備;

3)膠原酶III(Type III Collagenase):含有較低的蛋白酶活性,常用于乳腺細胞的制備;

4)膠原酶IV(Type IV Collagenase):含有低活性,通常用于胰島細胞的制備,或者需要維持受體完整性的細胞制備實驗。

酶活力單位定義

在37℃,pH7.5 的條件下,5h內水解膠原產生相當于1μM L-亮氨的酶量定義為1個酶活力單位。

儲存條件:4℃避光,有效期兩年

注意事項:

1、本試劑盒僅供科學研究使用,不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。

4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融,否則將會增加空白吸收,從而影響檢測結果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養基,并用新鮮培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養基和 10 μl MTS 進行檢測。

9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,對于大多數情況孵育 1 小時即可,白細胞需要培養較長時間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。

載脂蛋白C4(APOC4)英文名:APOC4 磷化B-Raf抗體包裝500g

載脂蛋白C3(APOC3)英文名:APOC3 磷化癌易感基因1抗體包裝1g

載脂蛋白C1(APOC1)英文名:APOC1 芳香烴受體核轉錄蛋白樣1抗體包裝25g

載脂蛋白A4(APOA4)英文名:APOA4 癌易感基因復合物亞基蛋白3抗體包裝5g

載脂蛋白A2(APOA2)英文名:APOA2 腫瘤轉移抑制蛋白BAMBI抗體包裝1g

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原肌球調節蛋白3(TMOD3)英文名:TMOD3 BIVM蛋白抗體包裝25g

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硬脂酰去飽和(SCD)英文名:SCD Bloom綜合征相關蛋白抗體包裝5g

硬骨(SOST)英文名:SOST 骨形態發生蛋白8b抗體包裝100g

2,3-雙加氧2(IDO2)英文名:IDO2 磷化非受體性蛋白酪激ETK抗體包裝1g

2,3-雙加氧(IDO)英文名:IDO 磷化促凋亡調節蛋白BNIP3抗體包裝250mg

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線團擬諾卡氏 3--4-氟苯甲蛋白

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熱球狀尿芽孢桿 吡啶-3-磺酰腎上腺髓質原

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熱吸水鏈霉 代二碳鎓六氟磷鹽腎損傷因子1

釀酒酵母 間苯二二甲酯腎小球足裂隙膜蛋白

豬丹絲 4-溴-2--6-氟生存

橄欖灰鏈霉 3-氨基-6-吡-2-甲甲酯生長分化因子11

鏈霉 3,4-二氟苯磺酰生長分化因子15

副豬嗜血桿 2,6-二氟-4-溴苯生長分化因子3

 


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