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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> Gram碘液
貨號(hào) | FS-X10104 |
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產(chǎn)品介紹:
用途: 主要用于革蘭染色等 注意事項(xiàng): 主要由碘組成,碘液濃度為0.34% 儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月 |
中文名稱(chēng):Gram碘液
英文名稱(chēng):
產(chǎn)品規(guī)格:100ml
貨號(hào):FS-X10104
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
盾形環(huán)柄菇磷化動(dòng)力相關(guān)蛋白1抗體Human PITPNC1 (Cytoplasmic phosphatidylinositol transfer protein 1) 人SH2攜帶蛋白(SHC/SLP-76)免疫試劑盒
西瓜枯萎病菌(可訂)DNA連接4抗體Human PTDSS1 (Phosphatidylserine synthase 1) 人Seryl- tRNA合成,質(zhì)(SARS/SERS)免疫試劑盒
大腸埃希氏桿菌二肽基肽6抗體Human NAGA(Alpha-N-acetylgalactosaminidase) 人Salusin Beta(Salusin β)免疫試劑盒
側(cè)耳二氫葉還原抗體Human CACNA1A(Voltage-dependent P/Q-type calcium channel subunit alpha-1A) 人Salusin Alpha(Salusin α)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌有絲分裂控制樣蛋白DIS3L抗體Human NKAP(NF-kappa-B-activating protein) 人SAA/LDL復(fù)合物 免疫試劑盒
鑒別試劑有絲分裂控制蛋白樣DIS3L2抗體Human PTDSS1 (Phosphatidylserine synthase 1) 人S100鈣結(jié)合蛋白P(S100P)免疫試劑盒
紅淡紫灰鏈霉菌DOM3Z蛋白抗體Human PCID2 (PCI domain-containing protein 2) 人S100鈣結(jié)合蛋白A9/鈣粒蛋白B(S100A9)免疫試劑盒
麥芽糖假絲酵母蓬亂蛋白2抗體Human PDIK1L (Serine/threonine-protein kinase PDIK1L) 人S100鈣結(jié)合蛋白A8/鈣粒蛋白A(S100A8)免疫試劑盒
中國(guó)臺(tái)灣無(wú)色需堿菌磷化蓬亂蛋白2抗體Human PELI3 (E3 ubiquitin-protein ligase pellino homolog 3) 人S100鈣結(jié)合蛋白A8/A9復(fù)合物(S100A8/A9)免疫試劑盒
細(xì)鏈格孢轉(zhuǎn)錄下調(diào)蛋白1抗體Human MYH11(Myosin-11) 人S100鈣結(jié)合蛋白A6/鈣粒蛋白A(S100A6)免疫試劑盒
葉生布勒擔(dān)子酵母脫氫/還原家族成員2抗體Human PROCA1 (Protein PROCA1) 人S100鈣結(jié)合蛋白A12/鈣粒蛋白C(S100A12)免疫試劑盒
谷棒桿菌牙本質(zhì)磷蛋白抗體Human R3HDML (Peptidase inhibitor R3HDML) 人S100鈣結(jié)合蛋白A11(S100A11)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌Dermokine β蛋白抗體Human PPP1R13B (Apoptosis-stimulating of p53 protein 1) 人RNA結(jié)合蛋白FUS(FUS/TLS)免疫試劑盒
柔嫩艾美耳球蟲(chóng)DPCR1蛋白抗體Human POMK (Protein O-mannose kinase) 人Rho家族GTP1(RND1)免疫試劑盒
Methylobacterium variabile表皮源性蛋白6抗體Human PKN1 (Serine/threonine-protein kinase N1) 人Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激2(Rock-2)免疫試劑盒
金耳雙特異性蛋白磷7抗體Human METRN(Meteorin) 人Rho GDP解離抑制因子1(ARHGDIA/GDIA1)免疫試劑盒
龜裂鏈霉菌Streptomyces│rimosus 質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml睪
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格:100μg/mL,基體: 10%HCl
NRRL1808資源名稱(chēng): 曲霉 質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,基體:HCI
Gram碘液多主葡萄殼 3-苯并呋喃酮顆粒結(jié)合型淀粉合成
黑曲霉 2-(二氟甲氧基)苯甲吡咯啉羧還原
雜色曲霉 溴化鈣輔I
無(wú) 化鈣水合物蛋白激
門(mén)多薩假單胞 二對(duì)甲苯?;?D- 一水合物整合
鴨疫里氏桿 4-羥基苯海藻糖合成
埃里鏈格孢 2-(二異基膦)乙
沃氏富鹽 香蘭鹽鹽糖原合成
鮑姆木層孔 2-溴酰谷轉(zhuǎn)氨
釀酒酵母 乙鈷質(zhì)膜ATP
香菇 4-氧代-3-羰甲酯鹽鹽二氫黃酮還原
異配囊接霉原變種 D-纈甲酯鹽鹽鐵氧原蛋白
膿腫分枝桿 膽固甲酯鐵氧原蛋白
彎孢霉 1--6-苯基己烷異戊二烯合成
枯草芽孢桿 1-硝基-4-(三氟甲氧基)苯單萜烯合成
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