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貨號 | FS-X10199 |
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產品介紹:
用途: 用于液體浸制真菌標本的制作。一般真菌的保存推薦此液。 注意事項: 主要由乙醇、福爾馬林等組成。 儲存條件:室溫,避光,12個月 |
中文名稱:真菌保存液Ⅰ
英文名稱:
產品規格:100ml
貨號:FS-X10199
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
球孢白僵菌葡萄糖-6磷脫氫抗體Human TPRKB 大鼠蛋白(nephrin)免疫試劑盒
金針菇F5眼發育相關基因蛋白ODAG抗體Human TOR1AIP2(Torsin-1A-interacting protein 2) 大鼠神經營養因子4(NT-4)免疫試劑盒
鼠李糖乳桿菌特異性囊腫病液體蛋白15Human TRA2A 大鼠神經營養因子3(NT-3)免疫試劑盒
膠囊青霉特異性囊腫病液體蛋白15Human TPRX1 大鼠神經營養的酪激1型受體(NTRK1)免疫試劑盒
深紅酵母生長激釋放因子受體抗體Human TPX2 大鼠神經型一氧化氮合成(nNOS/NOS1)免疫試劑盒
灰色鏈球菌G蛋白偶聯受體115抗體Human TRAM2 大鼠神經特異性烯化(NSE)免疫試劑盒
澳大利亞平臍蠕孢G蛋白偶聯受體10抗體Human TR2IT1 大鼠神經肽Y(NPY)免疫試劑盒
釀酒酵母β-葡萄糖腦脂抗體Human TRAF1 大鼠神經肽W(NP-W)免疫試劑盒
栗褐芽孢桿菌半乳糖凝集相關蛋白A抗體Human TRA2B(Transformer-2 Protein Homolog Beta) 大鼠神經肽Nesfatin-1 免疫試劑盒
白吉利絲孢酵母半乳糖凝集12抗體Human TRADD 大鼠神經絲蛋白(NF)免疫試劑盒
黃桿菌γ基丁運載蛋白3抗體Human TRAF3 大鼠神經生長因子受體(TNFR superfamily,member 16)(NGFR)免疫試劑盒
釀酒酵母GTPIMAP家族成員1抗體Human TRAF3IP1 大鼠神經生長因子前體(proNGF)免疫試劑盒
塔里木類芽孢桿菌GTPIMAP家族成員2抗體Human TPPP2 大鼠神經生長因子(NGF)免疫試劑盒
紅色紅曲菌GTPIMAP家族成員3抗體Human Torsin A 大鼠神經顆粒(NG/NRGN)免疫試劑盒
紅緣擬層孔菌GTPIMAP家族成員4抗體Human GDF10(Bone morphogenetic protein 3B) 大鼠神經膠質纖維性蛋白(GFAP)免疫試劑盒
明亮發光桿菌*GTPIMAP家族成員5抗體Human TOX2(TOX high mobility group box family member 2) 大鼠神經降壓(NTS)免疫試劑盒
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質量規格:AR,6-10目或2-3mm連翹酯A
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質量規格:AR,8-16目或1-2mm桑根D
紅球菌Rhodococcus│sp. 質量規格:SPα-香附
真菌保存液Ⅰ絲狀支原體山羊亞種 2--4-甲氧基煙血栓調節蛋白
晶粒鬼傘 6-氟煙血纖蛋白原降解產物
青色鏈霉 5-氨基-2-甲氧基三氟甲苯血小板第三因子
青霉 2-苯甲酰血小板第四因子
血桿 甲基三苯基化磷血小板反應蛋白;凝血敏感蛋白1
三葉膠灰星 3-乙氧羰基苯血小板活化因子
假灰鏈霉 N-氨基嗎啉血小板生成
佛雷德里克斯堡假單胞 N-異基哌血小板型磷果糖激
戴爾福特屬 DL-1-(1-萘基)乙血小板衍化生長因子BB
大腸埃希氏 2-(3-苯甲酰基苯基)-血小板衍生生長因子
長根靜灰球 6-溴-1-己延胡索
虎掌* 3-溴-4-眼小畸形關聯轉錄因子
枯草芽孢桿 L-芐酯對甲苯磺鹽氧化低密度脂蛋白
傳染性支氣管炎病 4-胍基鹽鹽氧化低密度脂蛋白抗體
Formosa 1,2-二甲基-1,4,5,6-四氫嘧啶氧化型
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