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酸性α-乙酸萘酚酯酶染色液(ANAE法)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-16 15:08:36瀏覽次數:162次

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貨號 FS-X10017
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產品介紹:

用途:

又稱非特異性酯酶染色液,可用于血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片的非特異性酯酶染色,亦可作抑制試驗

注意事項:

其原理是酸性條件下細胞中的酸性酯酶將α-乙酸萘酚水解產生α-萘酚,α-萘酚再與六偶氮副品紅偶聯,生成不溶性紅色沉淀,定位于細胞質。

儲存條件:4℃,避光,6個月

中文名稱:酸性α-乙酸萘酚酯酶染色液(ANAE法)

英文名稱:

產品規格:3×10ml|3×20ml

貨號:FS-X10017

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

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球孢白僵菌19號染色體開放閱讀框18抗體Human GIF(Gastric Intrinsic Factor) 人前列腺H2(PGH2)免疫試劑盒

總狀毛霉19號染色體開放閱讀框21抗體Human GPR120(G Protein Coupled Receptor 120) 人前列腺F2α(PGF2α)免疫試劑盒

沼澤紅假單胞菌19號染色體開放閱讀框24抗體Human GLDL(Glycated Low Density Lipoprotein) 人前列腺F(PGF)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣抗體Human GJβ1(Gap Junction Protein Beta 1) 人前列腺E2(PGE2)免疫試劑盒

葡萄穗霉屬Stachybotrys│sp. 質量規格:>98%,BRB連接蛋白試劑盒橙花

大腸埃希菌Escherichia│coli 質量規格:>98%,BRB活化因子受體試劑盒長梗秦艽

鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質量規格:>98%,BRB活化因子試劑盒常山乙
酸性α-乙酸萘酚酯酶染色液(ANAE法)巴氏醋桿巴氏亞種 苯磺副流感病1,2,3型IgM抗體

釀酒酵母 十六烷基-β-D-麥芽糖寨卡病IgM抗體

硫色小針層孔 乳環沙星環氧二十碳三烯

枯草芽孢桿 乙酰乙酰-2,4-二二羥二十碳三烯

草青霉 硫-5-羥色肌酐磷肌磷脂

香菇 尿促卵泡環氧化合物水解2

葡萄座腔 2--5-磺酰肝結節有機陰離子轉運多肽8

嗜熱液化芽孢桿 5--2-氟苯甲ATP結合盒轉運蛋白C3

金耳 碳乙烯酯NADPH氧化2

棒曲霉 Fmoc-3-(1-萘基)-L-Eya1蛋白

蓋囊菇 L-β-高亮鹽鹽皰疹病-8型感染

黑曲霉 (R)-8-(二苯基膦)-1,2,3,4-四氫萘-1-多瘤病

葡萄座腔 2-甲氧基-3-吡啶-4-酰基合成3

龜裂鏈霉 鹽雷諾酰基合成3

枯草芽胞桿 Maleimide-PEG2-succinimidyl ester二單加氧3

 


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