當前位置:上海撫生實業有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞凋亡與增殖>> Caspase 9分光光度法檢測試劑盒
貨號 | FS-X9578 |
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操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實驗。
④如果發現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落, 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
產品屬性:
產品名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 產品貨號 |
Caspase-9 Colorimetric Assay Kit | 20T|50T|100T | FS-X9578 |
產品介紹:
本試劑盒適用于培養細胞及新鮮組織caspase-9 檢測。Caspase 家族在介導細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用。Caspase-9 是級聯酶的上游分子,可被線粒體向細胞質釋放的細胞色素 激活。激活的Caspase-9 可引起下游級聯酶的活性,如Caspase-3。Caspase-9 在正常狀態下以酶原的形式存在于胞漿中,沒有活性;但在細胞發生凋亡階段時則被激活。Caspase-9 分光光度法檢測試劑盒就是將caspase-9 序列特異性的多肽偶聯至發色基團,當該底物被caspase-9 剪切后,發色基團即游離出來,可通過酶標儀或分光光度計(λ=405nm 或400nm)測定其吸光值,可考察caspase-9 的活化程度。 注意事項 1. Caspase-9 Substrate 避光保存及使用。 2. 對某些凋亡誘導劑引起的細胞凋亡可能存在非依賴于Caspase-9 活化的機制,這種情況時利用本試劑盒檢測Caspase-9 活性無明顯改變,需要考慮凋亡機制中的其他信號通路。 3. 細胞數量需達到3~5×106 個或新鮮組織50-100mg,以便能達到測定需要的100~200μg 蛋白的要求,因為Caspase-9 的活性與細胞裂解液的蛋白含量有關,如測定的OD 值偏低,可通過增加細胞數量或組織量的方法來提高蛋白量。 |
注意事項:
1、本試劑盒僅供科學研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融,否則將會增加空白吸收,從而影響檢測結果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養基,并用新鮮培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養基和 10 μl MTS 進行檢測。
9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,對于大多數情況孵育 1 小時即可,白細胞需要培養較長時間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。
糖原合mei激mei3α(GSK3α)檢測試劑盒 forGlycogenSynthaseKinase3Alpha(GSK3a)
耳錨蛋白(OTOA)檢測試劑盒 forOtoancorin(OTOA)
Ⅱ型前膠原羧基端原肽(PⅡCP)檢測試劑盒 forProcollagenIIC-TerminalPropeptide(PIICP)
雌激su受體β(ERβ)檢測試劑盒 forEstrogenReceptorBeta(ERb)
DnaJ/Hsp40同源物亞家族C成員12(DNAJC12)檢測試劑盒 forDnaJ/HSP40HomologSubfamilyC,Member12(DNAJC12)
Anoctamin4蛋白(ANO4)檢測試劑盒 forAnoctamin4(ANO4)
輕肽鐵蛋白(FTL)檢測試劑盒 forFerritin,LightPolypeptide(FTL)
纖維膠凝蛋白1(FCN1)檢測試劑盒 forFicolin1(FCN1)
干擾suα17(IFNα17)檢測試劑盒 forInterferonAlpha17(IFNa17)
軟骨寡聚基質蛋白(COMP)檢測試劑盒 forCartilageOligomericMatrixProtein(COMP)
表面活性物質關聯蛋白D(SPD)檢測試劑盒 forSurfactantAssociatedProteinD(SPD)
降鈣su(CT)檢測試劑盒 forCalcitonin(CT)
輕肽鐵蛋白(FTL)檢測試劑盒 forFerritin,LightPolypeptide(FTL)
矢車菊α2(CENTα2)檢測試劑盒 forCentaurinAlpha2(CENTa2)
趨化因子C-X-C-基元受體3(CXCR3)檢測試劑盒 forChemokineC-X-C-MotifReceptor3(CXCR3)
白介su15(IL15)檢測試劑盒 forInterleukin15(IL15)
網狀蛋白3(RTN3)檢測試劑盒 forReticulon3(RTN3)
Caspase 9分光光度法檢測試劑盒氫溴suan右芬標準品 規格:500mg 英文名稱:
丙suan鈉標準品 規格:200mg 英文名稱:Sodium Propionate
標準品 規格:100mg 英文名稱:Ipratropium Bromide
沙利鉑相關物質B標準品 規格:15mg 英文名稱:
鹵貝他索丙suan酯標準品 規格:200mg 英文名稱:Halobetasol Propionate
沙利鉑相關物質F標準品 規格:25mg 英文名稱:
葡萄糖an鹽suan鹽標準品 規格:200mg 英文名稱:Glucosamine Hydrochloride
克霉zuo相關雜質A標準品 規格:25mg 英文名稱:
雙羥標準品 規格:200mg 英文名稱:Dicumarol
烏拉莫si汀標準品 規格:500mg 英文名稱:
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