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當前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞凋亡與增殖>> Caspase 9熒光法檢測試劑盒(AFC)
| 貨號 | FS-X9579 |
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英文名稱：Caspase-9 Fluorescence Metric Assay
產(chǎn)品規(guī)格：20T|50T|100T
貨號：FS-X9579
產(chǎn)品介紹:
本試劑盒適用于培養(yǎng)細胞及新鮮組織Caspase-9 檢測。Caspase 家族在介導細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用，其中Caspase-9 為關(guān)鍵的執(zhí)行分子，與DNA 斷裂、染色質(zhì)凝聚和凋亡小體形成有關(guān)。Caspase-9 在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中，沒有活性；但在細胞發(fā)生凋亡階段，它被激活，活化的Caspase-9 由兩個大亞基和兩個小亞基組成，裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物，終導致細胞凋亡。Caspase-9 熒光檢測試劑盒就是將Caspase-9 序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團。當?shù)孜锉籆aspase-9 剪切后，發(fā)色基團即游離出來，可通過熒光酶標儀測定其熒光強度（激發(fā)波長=485nm,發(fā)射波長=535nm）。 注意事項 1. Caspase-9 Substrate 避光保存及使用。 2. 對某些凋亡誘導劑引起的細胞凋亡可能存在非依賴于Caspase-9 活化的機制，這種情況時利用本試劑盒檢測Caspase-9 活性無明顯改變，需要考慮凋亡機制中的其他信號通路。 3. 細胞數(shù)量需達到3～5×106 個或新鮮組織50~100mg，以便能達到測定需要的100～200μg 蛋白的要求，因為Caspase-9 的活性與細胞裂解液的蛋白含量有關(guān)，如測定的RFU 值偏低，可以通過適當延長反應(yīng)的時間，如果值還是不高，可通過增加細胞數(shù)量或組織量的方法來提高蛋白量。 |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
Ⅹ(F10)檢測試劑盒 forCoagulationFactorX(F10)
基質(zhì)金屬蛋白mei7(MMP7)檢測試劑盒 forMatrixMetalloproteinase7(MMP7)
半乳凝su2(GAL2)檢測試劑盒 forGalectin2(GAL2)
葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白11(GLUT11)檢測試劑盒 forGlucoseTransporter11(GLUT11)
受體活性修飾蛋白2(RAMP2)檢測試劑盒 forReceptorActivityModifyingProtein2(RAMP2)
T-細胞可誘導共刺激分子配體(ICOSLG)檢測試劑盒 forInducibleT-CellCoStimulatorLigand(ICOSLG) 乳suan脫氫meiB(LDHB)檢測試劑盒 forLactateDehydrogenaseB(LDHB)
內(nèi)皮細胞TEK酪氨suan激mei(Tie2)檢測試劑盒 forTEKTyrosineKinase,Endothelial(Tie2)
微管蛋白β1(TUBβ1)檢測試劑盒 forTubulinBeta1(TUBb1)
轉(zhuǎn)錄激活因子7(ATF7)elisa檢測試劑盒 英文名稱：ATF7 ELISA Kit，ATF7，
脂質(zhì)運載蛋白10(LCN10)elisa檢測試劑盒 英文名稱：LCN10 ELISA Kit，LCN10，
周期su依賴性激mei4(CDK4)elisa檢測試劑盒 英文名稱：CDK4 ELISA Kit，CDK4，
整合suα5(ITGα5)elisa檢測試劑盒 英文名稱：ITGα5 ELISA Kit，ITGα5，
早期生長應(yīng)答因子3(EGR3)elisa檢測試劑盒 英文名稱：EGR3 ELISA Kit，EGR3，
原肌球蛋白4(TPM4)elisa檢測試劑盒 英文名稱：TPM4 ELISA Kit，TPM4，
原鈣黏su12(PCDH12)elisa檢測試劑盒 英文名稱：PCDH12 ELISA Kit，PCDH12，
乙酰輔meiA乙酰轉(zhuǎn)移mei2(ACAT2)elisa檢測試劑盒 英文名稱：ACAT2 ELISA Kit，ACAT2，
Caspase 9熒光法檢測試劑盒(AFC)加巴噴相關(guān)物質(zhì)E標準品 規(guī)格:25mg 英文名稱：
阿lvmi松雙丙suan酯標準品 規(guī)格:300mg 英文名稱：Alclometasone Dipropionate
羥氨芐junsu標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱：Cefadroxil
佛si可林標準品 規(guī)格:40mg 英文名稱：Forskolin
鹽suan金剛烷an標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱：Amantadine Hydrochloride
非諾芬鈉標準品 規(guī)格:500mg 英文名稱：Fenoprofen Sodium
美比達相關(guān)物質(zhì)C標準品 規(guī)格:15mg 英文名稱：
鹽suan雷尼替標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱：Ranitidine Hydrochloride
相關(guān)物質(zhì)A標準品 規(guī)格:10mg 英文名稱：
鹽suan替安標準品 規(guī)格:325mg 英文名稱：Cefotiam Hydrochloride
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