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貨號	FS-X9589

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：XTT細菌增殖及細菌毒性檢測試劑

英文名稱：XTT Bacteria Proliferation and Cytotoxicity Kit

產品規格：500T|1000T

貨號：FS-X9589

產品介紹:

XTT(二甲氧唑黃)是一種類似于MTT 的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，活細菌線粒體中存在與輔酶Ⅱ相關的脫氫酶，可將黃色的XTT 還原成水溶性的橘黃色的甲月贊。生成的甲臜能夠溶解在組織培養基中，不形成顆粒，可直接用酶聯免疫檢測儀檢測定吸光值。

操作方法

1. 96 孔板加入細菌100μL/孔（約1×104），置37℃ 5%CO2 細菌培養箱培養24 小時。2.加入適當濃度的受試化合物。3.將96 孔板在37℃，含5% CO2 空氣及100%濕度的細菌培養箱中孵育適當時間。

4. 向各孔中加入20 μl 的XTT 工作液。

5. 37℃下孵育1~4 小時。

6. 酶標儀在450nm 波長處檢測每孔的光密度。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

多巴an-β羥化mei(DBH)elisa檢測試劑盒英文名稱：DBH ELISA Kit，DBH，

低密度脂蛋白受體相關蛋白1(LRP-1)elisa檢測試劑盒英文名稱：LRP-1 ELISA Kit，LRP-1，

膽suan(CA)elisa檢測試劑盒英文名稱：CA ELISA Kit，CA，

促腎上腺皮質激su釋放因子(CRF)elisa檢測試劑盒英文名稱：CRF ELISA Kit，CRF，

腦腸肽(BGP/Gehrelin)elisa檢測試劑盒英文名稱：BGP/Gehrelin ELISA Kit，BGP/Gehrelin，

磷脂酰乙chun(PEth)elisa檢測試劑盒英文名稱：PEth ELISA Kit，PEth，

免疫球蛋白A(IgA)elisa檢測試劑盒英文名稱：IgA ELISA Kit，IgA，

粒細胞集落刺激因子(G-CSF)elisa檢測試劑盒英文名稱：G-CSF ELISA Kit，G-CSF，

可溶性血管內皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)elisa檢測試劑盒英文名稱：VEGFR-2/sFLK-1 ELISA Kit，VEGFR-2/sFLK-1，

人抗子宮內膜抗體(EMAb)elisa檢測試劑盒英文名稱：EMAb ELISA Kit，EMAb，

人抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)elisa檢測試劑盒英文名稱：dsDNA ELISA Kit，dsDNA，

人抗酒石suansuan性磷suanmei5b(TRACP-5b)elisa檢測試劑盒英文名稱：TRACP-5b ELISA Kit，TRACP-5b，

人抗補體1q抗體(C1q)elisa檢測試劑盒英文名稱：C1q ELISA Kit，C1q，

精氨suan脫羧mei(ADC)elisa檢測試劑盒英文名稱：ADC ELISA Kit，ADC，

降鈣su原(PCT)elisa檢測試劑盒英文名稱：PCT ELISA Kit，PCT，

促胰液su受體(SCTR)檢測試劑盒 forSecretinReceptor(SCTR)

前列腺suE合mei2(PTGES2)檢測試劑盒 forProstaglandinESynthase2(PTGES2)
XTT細菌增殖及細菌毒性檢測試劑非那西汀熔點標準標準品規格:500mg 英文名稱：

丙戊suan相關物質B標準品規格:50mg 英文名稱：

醋suan去氨加壓su標準品規格:1.91mg 英文名稱：

羥可待tong鑒別標準品規格:15mg 英文名稱：Oxytocin Identification

鹽suan多巴an標準品規格:200mg 英文名稱：Dopamine Hydrochloride

磺an醋酰鈉標準品規格:500mg 英文名稱：Sulfacetamide Sodium

鹽suan環ben扎林標準品規格:200mg 英文名稱：Cyclobenzaprine Hydrochloride

地紅霉su標準品規格:200mg 英文名稱：Dirithromycin

奧克立林標準品規格:500mg 英文名稱：Octocrylene

L-亮氨suan標準品規格:200mg 英文名稱：L-Leucine
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)