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| 貨號 | FS-X9593 |
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產品介紹:
AlamaBlue 細胞活力檢測試劑盒提供了一種可靠、靈敏、安全和低成本的快速有效檢測細胞活力與毒性的方法。AlamaBlue 通過在細胞生長的培養基中所產生的化學還原反應，將非熒光信號的染料轉換成為一紅色熒光物質，試鹵靈（9-羥基-3-異吩惡嗪酮7-羥基-3H-吩惡嗪-3-酮），從而檢測細胞的存活率。維持細胞需要還原性環境而抑制生長則表現為氧化型環境。細胞生長率相關的降低可表現為氧化還原指示劑從氧化型（非熒光素、紫色）轉為還原型（熒光素、紅色）。該熒光信號可以用530~560nm 的激發波激發，在590nm 處可以獲發射波，檢測570 和600nm 的的吸光度值，校正監測值，可以減去相應的570nm 和600nm 的背景吸光度值。檢測所產生的熒光信號是與樣品中的活細胞數成正比的。 AlamaBlue 細胞活性檢測試劑盒的靈敏度相似于[3H]胸苷法檢測細胞增殖法。根據不同類型的細胞，AlamaBlue 可以檢測到至少40個細胞，同時保證很好的重現性和靈敏度。作為試鹵靈（紫紅、紅色熒光）可以進一步被還原為水解化的試鹵靈（無色、無熒光），當細胞數量增多，所有的刃天青（7-羥基-3-羰基-10-氧化-三氫吩惡嗪）被轉換為試鹵靈（9-羥基-3-異吩惡嗪酮7-羥基-3H-吩惡嗪-3-酮），試劑盒的信號反而會發生衰減。因此，對于您所用的試劑盒來說，針對不同的細胞類型，應該調整您的細胞數，做相應的優化，才能得到更好的結果。 操作說明 以下操作可用作通用指導建議。考慮不同細胞類型與培養條件的差異性，有必要根據實際情況優化您的操作步驟。 1. 96 孔細胞培養板每孔100μL 培養基飼養細胞，控制細胞數目在40~10000 個/貼壁細胞，2000~500000 個/懸浮細胞。設置空培養基做對照。 2. 加入10μL AlamaBlue 溶液至培養基中，37 度孵育：24 小時（比色法讀數）；5-6 小時（熒光讀數）。 3. 檢測570nm 和600nm 的吸光度，或者用熒光微孔板讀數530nm 激發，590nm 發射波讀數。 4. 如果采用比色法檢測，選擇OD570-OD600 檢測，如果檢測熒光信號，請在校正OD 值后，先設置標準曲線，選擇合適您實驗的細胞佳濃度。 |
中文名稱：Alarma Blue細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒
英文名稱：AlamaBlue Cell Viability Assay Kit
產品規格：500T
貨號：FS-X9593
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
乙酰轉移mei(ChAT)檢測試劑盒 forCholineAcetyltransferase(ChAT)
顆粒體蛋白(GRN)檢測試劑盒 forGranulin(GRN)
肌球蛋白ⅩⅨ(MYO19)檢測試劑盒 forMyosinXIX(MYO19)
透明質suan結合蛋白1(HABP1)檢測試劑盒 forHyaluronanBindingProtein1(HABP1)
血栓調節蛋白(TM)檢測試劑盒 forThrombomodulin(TM)
半胱氨suan蛋白mei抑制劑1(CST1)檢測試劑盒 forCystatin1(CST1)
黏病毒耐藥蛋白2(MX2)檢測試劑盒 forMyxovirusResistance2(MX2)
白介su1δ(FIL1δ)檢測試劑盒 forInterleukin1Delta(FIL1d)
IgE-Fc片段受體Ⅱ(FcεRⅡ)檢測試劑盒 forReceptorIIForTheFcRegionOfImmunoglobulinE(FceRII)
G抗原10(GAGE10)檢測試劑盒 forGAntigen10(GAGE10)
Neurobeachin蛋白(NBEA)檢測試劑盒 forNeurobeachin(NBEA)
S100鈣結合蛋白B(S100B)檢測試劑盒 forS100CalciumBindingProteinB(S100B)
胰蛋白mei原激活肽(TAP)檢測試劑盒 forTrypsinogenActivationPeptide(TAP)
S100鈣結合蛋白A7(S100A7)檢測試劑盒 forS100CalciumBindingProteinA7(S100A7)
信號淋巴細胞激活分子家族成員7(SLAMF7)檢測試劑盒 forSignalingLymphocyticActivationMoleculeFamily,Member7(SLAMF7)
互生蛋白α1(SNTα1)檢測試劑盒 forSyntrophinAlpha1(SNTa1)
骨橋su(OPN)檢測試劑盒 forOsteopontin(OPN)
Alarma Blue細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒酒石suan鈉標準品 規格:500mg×4vials 英文名稱：Sodium Tartrate Dihydrate
左美丙嗪標準品 規格:200mg 英文名稱：Methotrimeprazine
雷特標準品 規格:200mg 英文名稱：Ceforanide
半乳糖chun標準品 規格:500mg 英文名稱：Galactitol
比林標準品 規格:200mg 英文名稱：Antipyrine
jia氧芐啶相關物質A標準品 規格:25mg 英文名稱：
力農標準品 規格:500mg 英文名稱：Amrinone
膽影suan標準品 規格:200mg 英文名稱：Iodipamide
jia硫咪zuo標準品 規格:200mg 英文名稱：Methimazole
奧沙標準品 規格:200mg 英文名稱：Oxazepam CIV
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