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當(dāng)前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學(xué)試劑>>細胞凋亡與增殖>> 吖啶橙染色試劑盒
| 貨號 | FS-X9694 |
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中文名稱：吖啶橙染色試劑盒
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：100T
貨號：FS-X9694
產(chǎn)品介紹:
橙(Acridine Orange，AO)為一種熒光染料，該染料具有膜通透性，能透過細胞膜，使核DNA和RNA染色。其激發(fā)波長為488nm，吸收波長為515nm。它與細胞中DNA和RNA 結(jié)合量存在差別，復(fù)合物可發(fā)出不同顏色的熒光，紅色熒光為AO-DNA(F>600nm),綠色熒光為AO-RNA或單鏈DNA(F>530nm)。因此，在熒光顯微鏡下觀察，橙可透過正常細胞膜，使細胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；而在凋亡細胞中，因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光，或黃綠色碎片顆粒；而壞死細胞黃熒光減弱甚至消失。橙AO 常與溴化乙啶EB 合用雙染，因EB 只染死細胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光，由此可區(qū)分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞。 儲存條件：-20℃避光保存。 有效期：一年。 |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
前列腺性磷(PAP)英文名：PAP 通道蛋白4抗體包裝5g
前列腺G/H合1(PTGS1)英文名：PTGS1 活化復(fù)制因子2抗體包裝5MG
前列腺F(PGF)英文名：PGF 腺苷單磷活化蛋白激β1抗體包裝5MG
前列腺E2合成(PGES)英文名：PGES 糖尿病相關(guān)肽/胰島淀粉樣肽抗體包裝1g
前列腺E2(PGE-2)英文名：PGE-2 血管緊張Ⅱ抗體包裝5g
前列腺E2(PGE2)英文名：PGE2 血管緊張Ⅱ受體1抗體包裝1g
前列腺E1(PGE1)英文名：PGE1 血管生成-1抗體包裝5g
前列腺D2(PGD2)英文名：PGD2 膜粘連蛋白5抗體包裝1g
前列環(huán)(PGI2)英文名：PGI2 重組膜粘連蛋白5抗體包裝5g
前白蛋白(PA)英文名：PA 銜接蛋白α-Adaptin抗體包裝1g
葡萄糖依賴性胰島釋放多肽(GIP)英文名：GIP 凋亡蛋白活性因子-1抗體（C端）包裝250mg
葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)英文名：GRP78 凋亡蛋白活性因子-1抗體（N端）包裝5g
葡萄糖激(GCK)英文名：GCK 三磷腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運蛋白G超家族成員2抗體包裝100g
葡萄糖6磷脫氫(G6PD)英文名：G6PD 載脂蛋白E抗體包裝500g
破骨細胞分化因子(ODF)英文名：ODF 淀粉樣肽前體蛋白抗體包裝100g
腺苷單磷活化蛋白激α2抗體免疫球蛋白M(IgM)Nintedanib esylate (BIBF 1120 esylate) 是一種有效的 VEGFR1/2/3，F(xiàn)GFR1/2/3 和&n
吖啶橙染色試劑盒冬菇 α-松油烯白介29
木糖葡糖酸醋桿* 橙皮白介3
食紅球 (+)-3-蒈烯白介31
嗜線蟲致病桿 柴胡總皂苷白介32
果生鏈核盤 3-甲氧基吡咯烷鹽酸鹽白介32R
裂褶 N-甲基-L-苯氨酸白介32γ
棒彎孢 15-150kDa雙色預(yù)染蛋白Marker白介33
Phoma medicaginis var. medicaginis 2-萘甲酰白介35
南節(jié)桿 N-甲基-L-苯氨酸白介36
Janibacter melonis 2,4,6-三硝基酚白介37
蘇云金芽孢桿 阿爾白介38
海摩替亞氏 卡林鈣白介4
地下新鞘氨 氧阿達唑白介5
Wautersiella 云煙浸膏白介6
普雷恩毛霉 云煙凈油白介6受體
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