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貨號(hào)	FS-X9694

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100T

貨號(hào)：FS-X9694

產(chǎn)品介紹:

橙(Acridine Orange，AO)為一種熒光染料，該染料具有膜通透性，能透過細(xì)胞膜，使核DNA和RNA染色。其激發(fā)波長(zhǎng)為488nm，吸收波長(zhǎng)為515nm。它與細(xì)胞中DNA和RNA 結(jié)合量存在差別，復(fù)合物可發(fā)出不同顏色的熒光，紅色熒光為AO-DNA(F>600nm),綠色熒光為AO-RNA或單鏈DNA(F>530nm)。因此，在熒光顯微鏡下觀察，橙可透過正常細(xì)胞膜，使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；而在凋亡細(xì)胞中，因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光，或黃綠色碎片顆粒；而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。橙AO 常與溴化乙啶EB 合用雙染，因EB 只染死細(xì)胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光，由此可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。

儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存。

有效期：一年。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

前列腺性磷(PAP)英文名：PAP 通道蛋白4抗體包裝5g

前列腺G/H合1(PTGS1)英文名：PTGS1 活化復(fù)制因子2抗體包裝5MG

前列腺F(PGF)英文名：PGF 腺苷單磷活化蛋白激β1抗體包裝5MG

前列腺E2合成(PGES)英文名：PGES 糖尿病相關(guān)肽/胰島淀粉樣肽抗體包裝1g

前列腺E2(PGE-2)英文名：PGE-2 血管緊張Ⅱ抗體包裝5g

前列腺E2(PGE2)英文名：PGE2 血管緊張Ⅱ受體1抗體包裝1g

前列腺E1(PGE1)英文名：PGE1 血管生成-1抗體包裝5g

前列腺D2(PGD2)英文名：PGD2 膜粘連蛋白5抗體包裝1g

前列環(huán)(PGI2)英文名：PGI2 重組膜粘連蛋白5抗體包裝5g

前白蛋白(PA)英文名：PA 銜接蛋白α-Adaptin抗體包裝1g

葡萄糖依賴性胰島釋放多肽(GIP)英文名：GIP 凋亡蛋白活性因子-1抗體（C端）包裝250mg

葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)英文名：GRP78 凋亡蛋白活性因子-1抗體（N端）包裝5g

葡萄糖激(GCK)英文名：GCK 三磷腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2抗體包裝100g

葡萄糖6磷脫氫(G6PD)英文名：G6PD 載脂蛋白E抗體包裝500g

破骨細(xì)胞分化因子(ODF)英文名：ODF 淀粉樣肽前體蛋白抗體包裝100g

腺苷單磷活化蛋白激α2抗體免疫球蛋白M(IgM)Nintedanib esylate (BIBF 1120 esylate) 是一種有效的 VEGFR1/2/3，F(xiàn)GFR1/2/3 和&n
吖啶橙染色試劑盒冬菇 α-松油烯白介29

木糖葡糖酸醋桿* 橙皮白介3

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果生鏈核盤 3-甲氧基吡咯烷鹽酸鹽白介32R

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