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APC-Brdu細胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-09 11:38:59瀏覽次數:173次

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貨號 FS-X9596
APC-Brdu細胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)正在熱銷的產品:內切-β-1,4-葡聚糖mei(Cx)測試盒 規格:100管/48樣 測試方法:微量法
內切-β-1,4-葡聚糖mei(Cx)測試盒 規格:50管/24樣 測試方法:可見分光光度法
外切-β-1,4-葡聚糖mei(C1)測試盒 規格:100管/48樣 測試方法:微量法
外切-β-1,4-葡聚糖mei(C1)測試盒 規格

產品介紹:

本試劑盒細胞增殖檢測是一個基于熒光檢測的實驗,可以監測細胞健康和通過胸苷摻合來估量DNA 合成從而監測細胞分裂。

溴脫氧尿苷(5-溴代-2'-脫氧尿苷, BrdU) 是一種合成的核苷酸即胸苷的類似物。BrdU 通常被用于檢測活組織中再生的細胞。

BrdU 可以摻合到復制細胞中新的合成DNA 中(在細胞周期S 期),在DNA 復制可代替胸苷。利用抗BrdU 的特異性抗體便可以用于檢測這個插入的化學品,從而檢測出細胞是否在復制其DNA。

中文名稱:APC-Brdu細胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)

英文名稱:BrdU cell proliferation Detection Kit

產品規格:20T

貨號:FS-X9596

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

Nicastrin蛋白(NCSTN)檢測試劑盒  forNicastrin(NCSTN)    

氨酰tRNA合成mei復合多功能相互作用蛋白1(AIMP1)檢測試劑盒  forAminoacyltRNASynthetaseComplexInteractingMultifunctionalProtein1(AIMP1)    

F-框蛋白32(FBXO32)檢測試劑盒  forF-BoxProtein32(FBXO32)    

硫氧還蛋白還原mei1(TrxR1)檢測試劑盒  forThioredoxinReductase1(TrxR1)    

鐵調su(Hepc)檢測試劑盒  forHepcidin(Hepc)    

層黏連蛋白α5(LAMα5)檢測試劑盒  forLamininAlpha5(LAMa5)    

轉運蛋白1(TNPO1)檢測試劑盒  forTransportin1(TNPO1)    

干細胞因子(SCF)檢測試劑盒  forStemCellFactor(SCF)    

90kDa熱休克蛋白αA1(HSP90αA1)檢測試劑盒  forHeatShockProtein90kDaAlphaA1(HSP90aA1)    

巰基suan硫轉移mei(MPST)檢測試劑盒  forMercaptopyruvateSulfurtransferase(MPST)    

抗神經節脂M1抗體(Anti-GM1)檢測試劑盒  forAnti-GangliosideM1Antibody(Anti-GM1)    

神經激肽A(NKA)檢測試劑盒  forNeurokininA(NKA)    

載脂蛋白A4(APOA4)檢測試劑盒  forApolipoproteinA4(APOA4)    

肥大細胞類糜蛋白mei1(CMA1)檢測試劑盒  forChymase1,MastCell(CMA1)    

絲氨suan組合因子5(SERINC5)檢測試劑盒  forSerineIncorporator5(SERINC5)    

腎上腺髓質su2(ADM2)檢測試劑盒  forAdrenomedullin2(ADM2)    

NK6同源框蛋白1(NKX6-1)檢測試劑盒  forNK6HomeoboxProtein1(NKX6-1)    
APC-Brdu細胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)環孢junsu標準品  規格:50mg  英文名稱:Cyclosporine

酒石suan啡諾標準品  規格:500mg  英文名稱:Levorphanol Tartrate CII

suan標準品  規格:200mg  英文名稱:Niacin

乙酰zuoan標準品  規格:2g  英文名稱:Acetazolamide

酒石suan雙氫標準品  規格:200mg  英文名稱:Dihydrocodeine Bitartrate CII

甘羅溴an甘羅溴an標準品  規格:200mg  英文名稱:Glycopyrrolate

異卡波肼標準品  規格:200mg  英文名稱:Isocarboxazid

二乙suan熒光su標準品  規格:200mg  英文名稱:Diacetylfluorescein

suanjia地孕tong標準品  規格:500mg  英文名稱:Megestrol Acetate

消旋蛋氨suan標準品  規格:200mg  英文名稱:Racemethionine

 


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