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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第8年

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AO/PI雙染試劑盒

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-05-09 13:56:47瀏覽次數(shù):165次

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貨號(hào) FS-X9696
AO/PI雙染試劑盒正在熱銷的產(chǎn)品:Arfaptin 2 ADP核糖化因子結(jié)合蛋白2抗體二二二 for HPLC, ≥99%
phospho-arfaptin 2(Ser260) 化ADP核糖化因子結(jié)合蛋白2抗體重氮酯 91%,≤10% dichloromethane
phospho-Arhgef2(Ser810) 化Rho鳥苷交換因子2抗體4-羥-環(huán)己烷酯 98%
Aromatase

產(chǎn)品介紹:

AO/PI 雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒是采用DNA探針雙染細(xì)胞核的方法檢測(cè)細(xì)胞的狀態(tài)。橙(Acridine Orange,AO)為一種熒光染料,該染料具有膜通透性,能透過細(xì)胞膜,使核DNA和RNA染色。其激發(fā)波長(zhǎng)為488nm,吸收波長(zhǎng)為515nm。它與細(xì)胞中DNA和RNA 結(jié)合量存在差別,復(fù)合物可發(fā)出不同顏色的熒光,紅色熒光為AO-DNA(F>600nm),綠色熒光為AO-RNA或單鏈DNA(F>530nm)。

在熒光顯微鏡下觀察,橙可透過正常細(xì)胞膜,使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光;而在凋亡細(xì)胞中,因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷,形成凋亡小體。橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光,或黃綠色碎片顆粒;而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。

Propidium Iodide是一種DNA結(jié)合性染料,其激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為488nm和630nm,產(chǎn)生紅色熒光,但無膜通透性,不能透過活細(xì)胞膜,只能染死細(xì)胞。因此,在熒光顯微鏡下觀察,正常細(xì)胞不能著色,早期凋亡細(xì)胞呈微弱紅光,晚期凋亡細(xì)胞紅光加強(qiáng),壞死細(xì)胞呈強(qiáng)紅色熒光。

儲(chǔ)存條件:染色液2-8℃避光保存。試劑C 2-8℃保存。

中文名稱:AO/PI雙染試劑盒

英文名稱:

產(chǎn)品規(guī)格:100T

貨號(hào):FS-X9696

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

Ⅷ(FⅧ)英文名:FⅧ 銜接蛋白β抗體包裝1g

Ⅶ(FⅦ)英文名:FⅦ 銜接蛋白γ/γ-Adaptin抗體包裝250mg

Ⅵ(FⅥ)英文名:FⅥ 通道蛋白-9抗體包裝5g

Ⅴ(FⅤ)英文名:FⅤ 膜粘連蛋白A3抗體包裝1g

Ⅳ(FⅣ)英文名:FⅣ 膜粘連蛋白 A4抗體包裝50mg

Ⅱ(FⅡ)英文名:FⅡ 磷化蛋白激B抗體包裝25g

Ⅰ(FⅠ)英文名:FⅠ 磷化腺苷單磷活化蛋白激α1抗體包裝5g

凝血原片段F1+2(F1+2)英文名:F1+2 磷化蛋白激B抗體包裝1g

凝血受體(TR)英文名:TR 脫氧胞苷脫蛋白抗體包裝250mg

凝血抗凝血復(fù)合物(TAT)英文名:TAT 蛋白激錨定蛋白13抗體包裝1g

凝溶膠蛋白(Gelsolin)英文名:Gelsolin AP-1μ2抗體包裝5g

尿微量白蛋白(ALB)英文名:ALB 肥大膜抑制性受體Allergin1抗體包裝5g

核苷磷化1(UPP1)英文名:UPP1 腦鈉通道蛋白1抗體包裝25MG

尿激型纖溶原激活物受體(PLAUR/uPAR)英文名:PLAUR/uPAR 肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2/3復(fù)合亞單位B1抗體包裝25g

α2巨球蛋白樣蛋白1抗體 α2ML1免疫球蛋白G(IgG)Nintedanib (BIBF 1120) is a potent triple angiokinase inhibitor for VEGFR1/2/3,
AO/PI雙染試劑盒彎孢 中國(guó)肉桂皮油半乳糖凝集9

枯草芽孢桿 黑莓提取物胞漿型磷脂A2

大腸埃希氏桿 秘魯浸膏胞外超氧化物歧化

茯苓 杏子提取物飽腹因子

熒光假單胞 蘋果粉吡啶交聯(lián)物

美澳型核果褐腐病 甘草提取物(粉)表面活性蛋白A

放線纖維 KN-62表面活性蛋白D

藍(lán)色犁頭霉 磷脂酰甘油 PG表皮生長(zhǎng)因子

休哈塔假絲酵母 4-(三氟甲基)噠-3,5-二總表皮生長(zhǎng)因子受體

連香樹迪茲氏 2--4-氨基-5-甲氧基嘧啶表皮生長(zhǎng)因子受體2

巨大芽孢桿 N,N-二甲基對(duì)甲苯氨酸氨基轉(zhuǎn)移

食吡啶紅球 烯酸烯酯二

普通青霉 丁酸橙花酯酮

釀酒酵母 三正丁基膦酮酸激M2型同工

小牛葡萄球 1-(3-羥基-4-甲氧基苯基)-3-甲基-1-丁酮酮酸脫氫激1

 


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