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| 貨號 | FS-X9771 |
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產品介紹:
本試劑盒是一種基于衰老時SA-β-Gal(senescence-associated β-galactosidase)活性水平上調而對衰老細胞或組織進行染色檢測的試劑盒。在普通的光學顯微鏡下就可以觀測到細胞或組織的衰老情況。本試劑盒可以用于培養細胞的衰老檢測，也可以用于組織切片的衰老檢測。 試劑盒組份： β-半乳糖苷酶染色固定液—————100ml X-Gal溶液————————————5ml β-半乳糖苷酶染色液A——————1ml β-半乳糖苷酶染色液B——————1ml β-半乳糖苷酶染色液C——————100ml 絕大多數正常細胞被認為僅有有限的分裂能力，在不能分裂后就進入衰老(senescence)狀態。此時細胞仍然是存活的，但細胞的基因和蛋白的表達譜發生了很大改變。衰老(senescence)的細胞不能在一些常規的刺激下再誘導細胞分裂，并且衰老細胞的細胞周期分布也比較特殊，不同于一些損傷誘導的細胞休眠，也不同于細胞生長接觸抑制的情況。衰老細胞細胞通常體積變大，表達pH 6.0時有高酶活性的β-半乳糖苷酶。細胞衰老也被認為是生物體抑制腫瘤的一種方式，同時也是生物體老化(aging)的一種潛在原因。 本細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒，以X-Gal為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會生成深藍色產物。從而在光學顯微鏡下很容易觀察到變成藍色的表達β-半乳糖苷酶的細胞或組織。 |
中文名稱：細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒
英文名稱：Senescence β-Galactosidase Staining Kit
產品規格：>100次
貨號：FS-X9771
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
生長分化因子11(GDF11)英文名：GDF11 胞尿鳥結合蛋白1抗體包裝1g
生長分化因子1(GDF1)英文名：GDF1 原腸胚雙向形成相關蛋白抗體包裝5g
滲透性糖蛋白(Pgp)英文名：Pgp 分裂周期蛋白CDC123抗體包裝100g
腎足蛋白(NPHN)英文名：NPHN 神經蠟樣質脂褐質沉積病蛋白CLN3抗體包裝25g
腎臟腦蛋白(KIBRA)英文名：KIBRA 趨化樣因子超家族成員3抗體包裝100ml
腎損傷分子1(Kim1)英文名：Kim1 染色質修飾蛋白1B抗體包裝25ml
腎(REN)英文名：REN 冷誘導RNA結合蛋白抗體包裝5ml
腎上腺能受體β3(ADRβ3)英文名：ADRβ3 連接相關蛋白1抗體包裝25g
腎上腺能受體β2(ADRβ2)英文名：ADRβ2 連接相關蛋白2抗體包裝5g
腎上腺能受體β1(ADRβ1)英文名：ADRβ1 磷化周期依賴性激5抗體包裝250mg
腎上腺能受體α1A(ADRα1A)英文名：ADRα1A 異戊烯半胱羧基轉移抗體包裝1g
神經源3(NEUROG3)英文名：NEUROG3 核交換因子CLLD7抗體包裝5g
神經元正五聚蛋白Ⅰ(NPTX1)英文名：NPTX1 趨化樣因子超家族成員4抗體包裝25g
神經元特異性烯化(NSE)英文名：NSE 趨化樣因子超家族成員7抗體包裝5g
神經營養因子4(NT4)英文名：NT4 趨化樣因子超家族成員5抗體包裝5g
蛹假交替單胞菌Pseudoalteromonas│undina 質量規格：純度98%轉錄因子E2F1 紫莖女貞B;Ligupurpurosi
玫瑰色庫克菌Kocuria│roseus 質量規格：純度大于98%,USPgrade轉錄因子AP-1 紫莖女貞A ;Ligupurpuros
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質量規格：含量測定,HPLC>99%,標準品轉化生長因子-β誘導蛋白IG-H3試劑盒左旋肉堿; L(-)-Carnitine
細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒梭 5-甲基喹喔林信號3A
腦膜膿性金黃桿 偏鎂信號4A
異常漢遜酵母異常變種 甘鋁性別決定區Y框蛋白2
鏈格孢 蘋果專化型 5-甲基-2-噻吩甲性結合球蛋白
釀酒酵母 四羥基二烷胸合成
橙色標樁 磷三(1,3-二異基)酯胸腺活化調節趨化因子
平菇 L-3-苯基乳甲酯胸腺嘧啶核磷化
大腸埃希氏 2-甲巰基苯并噁唑胸腺β4
雙孢蘑菇 3-溴-4-胸腺β4樣蛋白3
紙葡萄穗霉 2-溴-5-α1
乳乳球乳亞種 3,5-二吡啶-4-甲雄烯二酮
芽孢桿屬 1,1-環基亞磺酯嗅質蛋白4
雙通道計時定時器 2-乙基己鋅, Zn, contains 1% diethylene glycol monomet溴脫氧核
Pseudomonas taiwanensis 1,5-二甲基-2-硝基亞氨基六氫-1,3,5-三血管活性腸肽
友好戈登氏 二乙基已鈣血管緊張1-7
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