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貨號	FS-X9602

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：0.1M 硼酸緩沖液，pH8.4

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

貨號：FS-X9602

產(chǎn)品介紹:

本產(chǎn)品為0.1M 的硼酸緩沖液。可應(yīng)用于BrdU 增殖檢測酸處理的中和等實驗。本品含有100mM 的硼酸、75mM NaCl，25mM 的四硼酸鈉，pH 為8.4。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

脂su2(LPIN2)elisa檢測試劑盒英文名稱：LPIN2 ELISA Kit，LPIN2，

整合suα2(ITGα2)elisa檢測試劑盒英文名稱：ITGα2 ELISA Kit，ITGα2，

早期內(nèi)體抗原1(EEA1)elisa檢測試劑盒英文名稱：EEA1 ELISA Kit，EEA1，

原肌球蛋白1α(TPM1)elisa檢測試劑盒英文名稱：TPM1 ELISA Kit，TPM1，

原卟啉原氧化mei(PPOX)elisa檢測試劑盒英文名稱：PPOX ELISA Kit，PPOX，

乙醛氧化mei1(AOX1)elisa檢測試劑盒英文名稱：AOX1 ELISA Kit，AOX1，

丙氨suan轉(zhuǎn)氨mei/谷丙轉(zhuǎn)氨mei(ALT/GPT)elisa檢測試劑盒英文名稱：ALT/GPT ELISA Kit，ALT/GPT，

白介su2(IL-2)elisa檢測試劑盒英文名稱：IL-2 ELISA Kit，IL-2，

白細(xì)胞抗原B27(HLA-B27)elisa檢測試劑盒英文名稱：HLA-B27 ELISA Kit，HLA-B27，

阿黑皮su原(POMC)elisa檢測試劑盒英文名稱：POMC ELISA Kit，POMC，

β-防御su2(β-BD-2)elisa檢測試劑盒英文名稱：β-BD-2 ELISA Kit，β-BD-2，

α輔肌動蛋白1(ACTN-1)elisa檢測試劑盒英文名稱：ACTN-1 ELISA Kit，ACTN-1，

Toll樣受體1(TLR1)elisa檢測試劑盒英文名稱：TLR1 ELISA Kit，TLR1，

P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白(P-cad)elisa檢測試劑盒英文名稱：P-cad ELISA Kit，P-cad，

G蛋白偶聯(lián)膽汁suan受體1(GPBAR1)elisa檢測試劑盒英文名稱：GPBAR1 ELISA Kit，GPBAR1，

c-Jun氨基末端激mei/應(yīng)急激活的蛋白mei(JNK/SAPK)elisa檢測試劑盒英文名稱：JNK/SAPK ELISA Kit，JNK/SAPK，

B細(xì)胞淋巴瘤因子6(Bcl6)elisa檢測試劑盒英文名稱：Bcl6 ELISA Kit，Bcl6，
0.1M 硼酸緩沖液，pH8.4ben磺保松標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Sulfinpyrazone

異舒普林鹽suan鹽標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Isoxsuprine Hydrochloride

一水天冬酰an標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Asparagine Monohydrate

糖二suan鈣標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Calcium Saccharate

芹菜元-7-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:30mg 英文名稱：Apigenin-7-glucoside

麥角固chun標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：Ergosterol

lv氮平標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：Clozapine

lv氮平分離度用混合物標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:30mg 英文名稱：Clozapine Resolution Mixture

鹽suan依達(dá)比星標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：Idarubicin Hydrochloride

丙suansu標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Testosterone Propionate CIII
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)