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PluronicF-127

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-11 15:08:20瀏覽次數:174次

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貨號 FS-X9789
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中文名稱:PluronicF-127

英文名稱:

產品規格:1g

貨號:FS-X9789

產品介紹:

Pluronic F-127是一種非離子型表面活性劑,它具有100%的活性并且對細胞相對無毒性的,常與染料AM酯一起使用,以增強其水溶性。它在低溫下可溶,但是在室溫下成凝膠狀。

使用Pluronic? F-127 作為探針加載助溶劑由于某些AM 酯在水溶液中不溶解,低毒性的Pluronic? F-127 常常被用于促進細胞加載染料。這種非離子型的去污劑在在DMSO 中的終濃度可以達到20%(w/v)。有時在制備儲液時,也會用到Pluronic? F-127,40 度溫和加熱可以協助Pluronic? F-127 溶于DMSO,但Pluronic? F-127 可以降低AM 酯的穩定性,所以,建議好僅在工作液中使用Pluronic? F-127。

備注:Pluronic? F-127 制備成20%的DMSO 儲液后,避光保存,有效期6 個月。

儲存:RT,有效期12個月。

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

激活蛋白C(APC)英文名:APC 9號染色體開放閱讀框139抗體包裝1g

激活T-細胞核因子1(NFATC1)英文名:NFATC1 9號染色體開放閱讀框140抗體包裝5g

基質細胞衍生因子4(SDF4)英文名:SDF4 9號染色體開放閱讀框142抗體包裝1g

基質細胞衍生因子1(SDF1)英文名:SDF1 9號染色體開放閱讀框163抗體包裝5g

基質金屬蛋白9(MMP9)英文名:MMP9 9號染色體開放閱讀框169抗體包裝25g

基質金屬蛋白8(MMP8)英文名:MMP8 9號染色體開放閱讀框173抗體包裝5g

基質金屬蛋白7(MMP7)英文名:MMP7 9號染色體開放閱讀框21抗體包裝100g

基質金屬蛋白3(MMP3)英文名:MMP3 磷化絲/蘇蛋白激II β/casein kinase IIβ抗體包裝25g

基質金屬蛋白23B(MMP23B)英文名:MMP23B 癌胚抗原抗體包裝100g

基質金屬蛋白2(MMP2)英文名:MMP2 癌胚抗原抗體包裝25g

基質金屬蛋白19(MMP19)英文名:MMP19 粘附分子相關蛋白/癌基因下調蛋白抗體包裝500g

基質金屬蛋白15(MMP15)英文名:MMP15 淋巴抗原Ly6c抗體包裝25g

基質金屬蛋白14(MMP14)英文名:MMP14 周期E抗體包裝5g

基質金屬蛋白13(MMP13)英文名:MMP13 7號染色體開放閱讀框50抗體包裝25g

基質金屬蛋白12(MMP12)英文名:MMP12 7號染色體開放閱讀框53抗體包裝5g

JCM3025=CBS429.61=DSM43023=IFM1175=IFO13資源名稱: 白色鏈孢囊菌 質量規格:>95%,EP,BR脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒銀杏雙黃;ginkgetin

雅致小克銀漢霉Cunninghamella│elegans 質量規格:效價測定整合連接激1試劑盒楊芽黃;Tectochrysin

葡萄座腔菌屬Botryosphaeria│sp. 質量規格:>99%,USP34整合β4結合蛋白試劑盒魚藤;deguelin
PluronicF-127玉蕈離褶傘 4-乙氧基-2,3-二氟苯軸突生長誘向因子1

黑曲霉 (二甲基氨基)乙鹽鹽侏儒相關轉錄因子2

產氨棒桿 癸二二酰肼轉化生長因子α

奧氏蜜環 葡乳鈣轉化生長因子β

枯草芽孢桿 4--2-甲氧基-3-吡啶甲甲酯轉化生長因子β1

嗜低鹽適鹽 2-乙氧基-4-溴苯轉化生長因子β2

異常漢遜酵母異常變種 5-氨基-2,4-二氟甲酯轉化生長因子β3

閃光須霉 4-溴丁轉化生長因子-β誘導蛋白IG-H3

少根根霉東京變種 乙異酯轉甲狀腺蛋白

黑曲霉 鹽萬乃洛韋轉錄因子1

麥根腐平臍蠕孢 沙坦轉錄因子E2F1

東方伊薩酵母 2-基-4,5-咪唑二羧二甲酯轉錄因子抗體-1

大豆慢生根瘤 1,2-二溴四氟乙烷轉錄因子相關孤獨受體γt

毛相思根瘤 (4R-Cis)-6-羥甲基-2,2-二甲基-1,3-二氧六環-4-乙叔丁酯轉鐵蛋白

高山被孢霉 4-甲基-3-酮基-N-苯基戊酰轉鐵蛋白受體

 


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