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貨號	FS-X9655

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：阿爾瑪藍

英文名稱：Alamar Blue

產品規格：100T

貨號：FS-X9655

產品介紹:

阿爾瑪藍（Alamar Blue）是一種氧化還原指示劑，能根據代謝活性產生吸亮度變化和熒光信號。這是一種安全無毒的染料，可用于細胞活性和細胞增殖的定量分析以及細胞因子生物測定和體外細胞毒性研究，能有效測定動物、真菌和細菌細胞的天然代謝活性。Alamar Blue在氧化狀態下呈現紫藍色無熒光性，而在還原狀態下，轉變為呈粉紅或紅色熒光的還原產物，反映所研究的細胞或微生物對氧分子的消耗，因而常被用作氧化還原指示劑，以顯示被觀察細胞和細菌的代謝活動。這種測定是基于具有代謝活性的細胞將試劑轉換成熒光和比色指示劑的能力。在細胞增殖過程中，細胞內NADPH/NADP、FADH/FAD、FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高，處于還原環境。攝入細胞內的染料被這些代謝中間體及細胞色素類還原后釋放到細胞外并溶于培養基中，使培養基從無熒光的靛青藍變成有熒光的粉紅色。受損和無活性細胞具有較低的天然代謝活性，因此對應的信號較低。可以用普通分光光度計或熒光光度計檢測，其激發光波長在530-560 nm之間，發射光波長為590 nm。吸光度和熒光強度與活性細胞數成正比。

本品可廣泛地用于細胞增殖代謝，藥物的細胞毒作用的體外測定以及病原微生物的的快速檢測與鑒定。與臺盼蘭、TTC、MTT、MTS等分析法相比，Alamar Blue具有更多的優勢。Alamar Blue采用單一試劑，可以連續、快速地檢測細胞的增生狀態。由于Alamar Blue對細胞無毒、無害，不影響細胞的抗體合成與分泌等活性，因此可以對同一批細胞的增生狀態進行連續觀察和進一步的實驗觀察，因此有操作簡便和幾乎不干擾細胞正常代謝的特點。

注意事項

1）需客戶自行準備100%還原型Alamar Blue試劑。為得到還原型Alamar Blue，需配制Alamar Blue與細胞培養基的混合溶液，Alamar Blue與細胞培養基的比值為1:10，高壓滅菌15min。（不能對濃縮的Alamar Blue高壓滅菌，也不能用PBS配制溶液，因為100%還原型Alamar Blue在PBS中不穩定。）

2）為得到結果，建議實驗前先摸索孵育時間和接種細胞數量。

3）合適密度的細胞可以增加檢測靈敏度。對于96 孔板，我們建議每孔接種100 微升細胞，細胞濃度范圍為：貼壁細胞在100-10,000/孔，懸浮細胞在2,000-50,000/孔，并以培養基為空白對照。對于384 孔板，細胞濃度和接種量均減半。

4）整個過程均應為無菌操作，因為微生物污染物同樣可以還原檢測試劑而影響實驗結果。

5）注意接種細胞濃度和加入檢測試劑后孵育時間。細胞濃度過高或孵育時間過長，會導致繼發性還原反應，產生無色和熒光消失。

6）孵育時，須避光。

7）本產品可以使用熒光或分光光度計檢測，但熒光的靈敏度高，實驗誤差小，推薦使用熒光檢測。

儲存條件：4℃，有效期一年

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

轉化受體電位陽離子通道亞家族M成員1(TRPM1)檢測試劑盒 forTransientReceptorPotentialCationChannelSubfamilyM,Member1(TRPM1)

Ⅶ(F7)檢測試劑盒 forCoagulationFactorVII(F7)

泛su(Ub)檢測試劑盒 forUbiquitin(Ub)

運動神經元生存蛋白2(SMN2)檢測試劑盒 forSurvivalOfMotorNeuron2,Centromeric(SMN2)

絲氨suan蛋白mei23(PRSS3)檢測試劑盒 forProtease,Serine3(PRSS3)

羥賴氨suan(Hyl)檢測試劑盒 forHydroxylysine(Hyl)

細胞色sub-245β肽(CYBβ)檢測試劑盒 forCytochromeb-245BetaPolypeptide(CYBb)

谷丙轉氨mei(ALT)檢測試劑盒 forAlanineAminotransferase(ALT)

CD19分子(CD19)檢測試劑盒 forClusterOfDifferentiation19(CD19)

基質金屬蛋白mei24(MMP24)檢測試劑盒 forMatrixMetalloproteinase24(MMP24)

磷suanmei張力蛋白同源物(PTEN)檢測試劑盒 forPhosphataseAndTensinHomolog(PTEN)

信號su4A(SEMA4A)檢測試劑盒 forSemaphorin4A(SEMA4A)

肌球蛋白ⅠF(MYO1F)檢測試劑盒 forMyosinIF(MYO1F)

玻連蛋白(VTN)檢測試劑盒 forVitronectin(VTN)

T-細胞激活連接蛋白(LAT)檢測試劑盒 forLinkerForActivationOfT-Cell(LAT)

心肌肌鈣蛋白T(TNNT2)檢測試劑盒 forTroponinTType2,Cardiac(TNNT2)

凝溶膠蛋白(GS)檢測試劑盒 forGelsolin(GS)
阿爾瑪藍碘克沙chun相關物質E標準品規格:25mg 英文名稱：

夫定相關物質B標準品規格:25mg 英文名稱：

鹽suan克林霉su棕櫚酯標準品規格:500mg 英文名稱：

甘油單油suan酯90％標準品規格:250mg 英文名稱：Glyceryl Monooleate 90%

甘油單油suan酯40％標準品規格:500mg 英文名稱：Glyceryl Monooleate 40％

替硝zuo相關物質B標準品規格:20mg 英文名稱：Tinidazole Related Compound B

鹽suan曲zuotong標準品規格:200mg 英文名稱：Trazodone Hydrochloride

聚乙二chun200標準品規格:1g 英文名稱：Polyethylene Glycol 200

聚乙二chun300標準品規格:1g 英文名稱：Polyethylene Glycol 300

聚乙二chun400標準品規格:1g 英文名稱：Polyethylene Glycol 400
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)