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貨號	FS-X9542

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：Caspase 4 活性檢測試劑盒

英文名稱：Caspase 4 Activity Assay Kit

產品規格：20次|100次

貨號：FS-X9542

產品介紹:

本試劑盒是采用分光光度法檢測細胞或組織裂解液中caspase 4酶活性或純化的caspase 4酶活性的試劑盒。本試劑盒用酶標儀檢測或容量不超過100μl的分光光度檢測杯檢測時，除標準曲線外可以檢測20個樣品。

Caspase是一個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 4有時被寫作caspase-4或caspase 4，可以和Apaf-1相互作用并參與細胞色素導致的caspase 3激活。Caspase 4也可以和caspase 14相互作用。

本Caspase 4活性檢測試劑盒是基于caspase 4可以催化底物Ac-LEVD-pNA(acetyl-Leu-Glu-Val-Asp p-nitroanilide)產生黃色的pNA(p-nitroaniline)，從而可以通過測定吸光度來檢測caspase 4的活性。pNA在405nm附近有強吸收。

試劑盒中提供了caspase 4催化產生的黃色產物pNA，可以作為定量caspase 4酶活性的標準品。

試劑盒組分：

裂解液——————8ml

檢測緩沖液——————8ml

Ac-LEVD-pNA(2mM)———200μl

pNA(10mM)——————200μl

儲存條件：-20℃。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

肌球蛋白ⅦA(MYO7A)elisa檢測試劑盒英文名稱：MYO7A ELISA Kit，MYO7A，

肌chun單磷suanmei3(IMPA3)elisa檢測試劑盒英文名稱：IMPA3 ELISA Kit，IMPA3，

紅細胞補體受體1(CR1)elisa檢測試劑盒英文名稱：CR1 ELISA Kit，CR1，

核糖核suanmeiT2(RNASET2)elisa檢測試劑盒英文名稱：RNASET2 ELISA Kit，RNASET2，

溶質載體家族16成員3(SLC16A3)elisa檢測試劑盒英文名稱：SLC16A3 ELISA Kit，SLC16A3，

親核suα6(KPNα6)elisa檢測試劑盒英文名稱：KPNα6 ELISA Kit，KPNα6，

醛固tong合mei(ALDOS)elisa檢測試劑盒英文名稱：ALDOS ELISA Kit，ALDOS，

前胰淀粉樣蛋白(ProIAPP)elisa檢測試劑盒英文名稱：ProIAPP ELISA Kit，ProIAPP，

葡萄糖轉運蛋白12(GLUT12)elisa檢測試劑盒英文名稱：GLUT12 ELISA Kit，GLUT12，

皮層肌動蛋白(CTTN)elisa檢測試劑盒英文名稱：CTTN ELISA Kit，CTTN，

尿黑suan1,2-雙加氧mei(HGD)elisa檢測試劑盒英文名稱：HGD ELISA Kit，HGD，

腦型脂肪suan結合蛋白(FABP7)elisa檢測試劑盒英文名稱：FABP7 ELISA Kit，FABP7，

膜聯蛋白A7(ANXA7)elisa檢測試劑盒英文名稱：ANXA7 ELISA Kit，ANXA7，

硫氧還蛋白還原mei3(TrxR3)elisa檢測試劑盒英文名稱：TrxR3 ELISA Kit，TrxR3，

磷脂meiB(PLB)elisa檢測試劑盒英文名稱：PLB ELISA Kit，PLB，

晚期糖基化終末產物受體(AGER)elisa檢測試劑盒英文名稱：AGER ELISA Kit，AGER，

突觸融合蛋白18(STX18)elisa檢測試劑盒英文名稱：STX18 ELISA Kit，STX18，
Caspase 4 活性檢測試劑盒

雙-乙基乙氧ben酚jia氧ben基三嗪相關物質混合物標準品

規格:100mg 英文名稱：Bemotrizinol Impurity Mixture

鹽suan貝那普利標準品規格:125mg 英文名稱：Benazepril Hydrochloride

伏立康zuo相關物質C 規格:10mg 英文名稱：

benjia地那an標準品規格:200mg 英文名稱：Denatonium Benzoate

環丙羧suan標準品規格:150mg 英文名稱：Fluoroquinolonic Acid

鹽suan沙星標準品規格:400mg 英文名稱：Ciprofloxacin Hydrochloride

fu康zuo標準品規格:200mg 英文名稱：Fluconazole

更昔韋相關物質A標準品規格:15mg 英文名稱：

乙ben妥英標準品規格:200mg 英文名稱：Ethotoin

ben琥an標準品規格:500mg 英文名稱：Phensuximide
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)