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| 貨號 | FS-X9657 |
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英文名稱：SRB Cell Proliferation and cytotoxicity assay kit
產品規格：500T
貨號：FS-X9657
產品介紹:
本試劑盒是一種常用的比色法檢測細胞增殖和毒性的試劑盒，其檢測原理：磺酰羅丹明（Sulforhodamine B，SRB）是一種水溶性蛋白染料，能與細胞內蛋白堿性氨基酸結合形成復合物，其結合于細胞中總蛋白量的多少可以反映細胞數的多少。在515nm波長處測得的吸光值與細胞數呈良好的線性關系。 本試劑盒檢測速度快、線性好、操作簡單方便，以96孔板為例，可檢測500次。 使用方法（以96孔板為例） 1）取出細胞，棄去培養液； 2）小心加入固定液，每孔100μl，4℃孵育1h，棄去固定液； 3）加入清洗液1，每孔100μl，室溫下靜置30s，棄去清洗液1，重復該步驟； 4）加入染色液，每孔50μl，室溫下避光孵育15min，棄去染色液； 5）加入清洗液2，每孔100μl，棄去清洗液2（該步驟需快速完成，以免染色漏出胞外），重復該步驟5-10次，直至把多染料洗盡為止； 6）加入溶解液，每孔100μl，室溫下避光孵育5min； 7）于515nm波長檢測其吸光值。 儲存條件：4℃，有效期1年 |
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
半胱氨suan蛋白mei抑制劑8(CST8)檢測試劑盒 forCystatin8(CST8)
成纖維細胞生長因子4(FGF4)檢測試劑盒 forFibroblastGrowthFactor4(FGF4)
絲裂原激活蛋白激mei激mei激mei1(MAP3K1)檢測試劑盒 forMitogenActivatedProteinKinaseKinaseKinase1(MAP3K1)
肌纖蛋白(MYOC)檢測試劑盒 forMyocilin(MYOC)
RNA結合基元蛋白38(RBM38)檢測試劑盒 forRNABindingMotifProtein38(RBM38)
溶血磷脂酰基轉移mei3(LPCAT3)檢測試劑盒 forLysophosphatidylcholineAcyltransferase3(LPCAT3)
內皮型一氧化氮合mei(NOS3)檢測試劑盒 forNitricOxideSynthase3,Endothelial(NOS3)
金屬泛激蛋白1(MPS1)檢測試劑盒 forMetallopanstimulin1(MPS1)
二氫葉suan還原mei(DHFR)檢測試劑盒 forDihydrofolateReductase(DHFR)
精氨suanmei(Arg)檢測試劑盒 forArginase(Arg)
粘膜關聯上皮趨化因子(MEC)檢測試劑盒 forMucosaeAssociatedEpitheliaChemokine(MEC)
Notch2氨基端樣蛋白(NOTCH2NL)檢測試劑盒 forNotch2N-TerminalLikeProtein(NOTCH2NL)
多配體蛋白聚糖1(SDC1)檢測試劑盒 forSyndecan1(SDC1)
組氨suan脫羧mei(HDC)檢測試劑盒 forHistidineDecarboxylase(HDC)
90kDa熱休克蛋白β1(HSP90β1)檢測試劑盒 forHeatShockProtein90kDaBeta1(HSP90b1)
白細胞特異性轉錄因子1(LST1)檢測試劑盒 forLeukocyteSpecificTranscript1(LST1)
結締組織生長因子(CTGF)檢測試劑盒 forConnectiveTissueGrowthFactor(CTGF)
磺酰羅丹明B(SRB)細胞增殖和毒性檢測試劑盒聚乙二chun20000標準品 規格:1g 英文名稱：Polyethylene Glycol 20000
聚乙二chun35000標準品 規格:1g 英文名稱：Polyethylene Glycol 35000
聚氧化乙烯標準品 規格:100mg 英文名稱：Polyethylene Oxide
鹽suan多星標準品 規格:50mg 英文名稱：Doxorubicin Hydrochloride
四丁酚chun標準品 規格:600mg 英文名稱：Tyloxapol
相關物質D標準品 規格:10mg 英文名稱：
羥基乙叉二膦suan標準品（HEDP） 規格:1g 英文名稱：Etidronic Acid Monohydrate
lv化芐乙氧an標準品 規格:500mg 英文名稱：Methylbenzethonium Chloride
丙suanlv倍他索標準品 規格:200mg 英文名稱：Clobetasol Propionate
鹽suanjia基多巴酯標準品 規格:200mg 英文名稱：Methyldopate Hydrochloride
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