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貨號 | FS-X9891 |
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培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
中文名稱:AO染色液(1mg/ml)
英文名稱:
產品規格:10ml
貨號:FS-X9891
產品介紹:
用途: 流式細胞術檢測細胞DNA含量,通過染色定量分析DNA,亦可通過熒光顯微鏡觀察形態變化。 注意事項: AO(Acridine Orange)在低濃度下與DNA結合較佳,工作濃度8.5ug/ml 儲存條件:4℃,避光,12個月 |
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
釀酒酵母膜粘連蛋白11抗體Human LPPR2 小鼠血纖蛋白原(Fbg)免疫試劑盒
白耙齒菌膜粘連蛋白13抗體Human LPP 小鼠血纖蛋白(fibrin)免疫試劑盒
雞傷門氏菌磷化促腎上腺皮質激ACTH抗體Human LMNB2 小鼠血栓B2(TXB2)免疫試劑盒
三葉草根瘤菌磷化蛋白激AKT1抗體Human LPXN 小鼠血栓A2(TXA2)免疫試劑盒
鏈霉菌磷化蛋白激B抗體Human LMF2 小鼠血栓前體蛋白(TpP)免疫試劑盒
滑菇磷化鈉ATP蛋白a1抗體Human LRAT 小鼠血清淀粉樣蛋白A3(SAA3)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌磷化內收蛋白a1抗體Human LRCH1 小鼠血漿激肽釋放(KLKB1)免疫試劑盒
烯霉鏈霉菌磷化腺單磷活化蛋白激α1抗體Human LIN7A 小鼠血紅氧合2(HO-2)免疫試劑盒
麥芽糖假絲酵母磷化腺單磷活化蛋白激α2抗體Human LIN28B 小鼠血紅氧合1(HO-1)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌性神經酰1抗體Human LITAF 小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉輔因子(vWF)免疫試劑盒
玫煙色棒束孢粘附調節分子1抗體Human LIN7B(Protein lin-7 homolog B) 小鼠血管舒緩激肽(BK)免疫試劑盒
玉大斑病菌氣味結合蛋白抗體Human Liprin alpha 1 小鼠血管生成樣蛋白4(ANGPTL4)免疫試劑盒
栗疫菌乙脫氫2抗體Human LIV-1 小鼠血管生成4(ANG-4)免疫試劑盒
果生鏈核盤菌膜粘連蛋白10抗體Human LMBR1L 小鼠血管生成2(ANG-2)免疫試劑盒
新月彎孢前梯度同源蛋白2抗體Human LMF2 小鼠血管生成1(ANG-1)免疫試劑盒
污黑腐皮殼乙脫氫5抗體Human LIN7A 小鼠血管生長(ANG)免疫試劑盒
金霉鏈霉菌Streptomyces│aureofaciens 質量規格:>30U/mg,BR半乳糖凝集-7試劑盒野鷲尾
豬呼吸與繁殖障礙綜合征病毒Arterivirus│Porcine respiratory and reproductive syndrome virus 質量規格:進分,BR半乳糖試劑盒3-乙酰基-11-基乳香
: FRI2008033資源名稱: 丁香假單胞菌 質量規格:BR板層相關多肽2亞型α試劑盒3-乙酰基乳香
AO染色液(1mg/ml)根霉 芴甲氧甲酰基-D-天冬Β叔丁酯抗磷脂A2受體抗體
金針菇(黃) 3-甲基-1-苯基吡唑CD25分子
大腸埃希 1,2,3,4-四氫苯并[b]氮雜卓-5-酮癌易感蛋白
pCMV-Gluc 7-甲基靛紅賴氨酰氧化同系物2
圍小叢殼 4-溴-2-氟芐單核趨化蛋白2
粉色小菇 9-苯基-9H-咔唑-3-哪酯型肝炎抗體
楚科奇海科維爾氏 咪唑[1,2-a]吡啶-2-腺三磷結合盒轉運體A1
豬鏈球II型 5-羥基-3-甲基烯化
未定德研所 甲辛酯色P450
黑腐皮殼屬 4-溴-2,5-二氟苯可溶性α–klotho蛋白
弗氏檸檬桿 (S)-叔亮氨庚型肝炎病IgG抗體
釀酒酵母 2,3-二馬來酐C1q腫瘤壞死因子相關蛋白12
淺玫瑰鏈霉 3--2-甲氧基吡啶表皮生長因子受體抗體
楊鏈格孢 二環基酮周期依賴性激4
耶納農球 5--2,3-二甲二甲酯ⅩI
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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