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貨號(hào)	FS-X9817

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：活細(xì)胞核酸染料-綠菁SYT

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：500μL

貨號(hào)：FS-X9817

產(chǎn)品介紹:

SYTO 綠色活細(xì)胞核酸染料( Ex/Em: 500/530 nm, bound to DNA)是一種具有細(xì)胞膜透性的核酸染料，其在于核酸結(jié)合之后熒光強(qiáng)度會(huì)得到顯著增強(qiáng)。SYTO 綠色活細(xì)胞核酸染料可以用于染死的或者活的真核細(xì)胞的RNA 和DNA，在革蘭氏細(xì)菌中同樣也適用。新型SYTO 綠色活細(xì)胞核酸染料具有如下重要特性：

細(xì)胞膜透性，可以穿過(guò)幾乎所有的細(xì)胞膜，包括哺乳動(dòng)物細(xì)胞和細(xì)菌。

摩爾吸光系數(shù)高，可見(jiàn)吸收光譜消光系數(shù)> 60,000 cm-1M - 1。

極低的熒光背景，未與核酸結(jié)合時(shí)，染料的量子產(chǎn)率通常<0.01。

與核酸結(jié)合之后，量子產(chǎn)率通常> 0.4。

SYTO 綠色活細(xì)胞核酸染料可以在不同的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中染活細(xì)胞或者固定細(xì)胞的核酸，能夠與配備了常規(guī)激光激發(fā)器或?qū)拵д彰鞴庠吹母鞣N熒光檢測(cè)設(shè)備匹配。

儲(chǔ)存：-20℃，避光，有效期6個(gè)月。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

WAP四二硫化物核心域蛋白1(WFDC1)英文名：WFDC1 磷化皮層肌動(dòng)蛋白抗體包裝25g

V-Rel網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病毒癌基因同源物B(RELB)英文名：RELB 磷化周期B1抗體包裝500g

V-Rel網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病毒癌基因同源物A(RELA)英文名：RELA 磷化周期B1抗體包裝1g

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T-細(xì)胞激活連接蛋白(LAT)英文名：LAT 核心結(jié)合因子α1抗體(成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子)Cbfα1包裝5g

Toll樣受體9(TLR9)英文名：TLR9 膽囊收縮8抗體包裝10MG

大奇異球菌Deinococcus│grandis 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR異質(zhì)性胞核核糖核蛋白C試劑盒洋艾;Absinthin

大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A3試劑盒α-亞麻;alpha-Linoleni

黃曲霉Aspergillus│flavus 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,可用于培養(yǎng)異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A2/B1試劑盒乙龍腦酯;Bornyl acetate
活細(xì)胞核酸染料-綠菁SYT宋氏志賀氏 1-(4-溴苯基)環(huán)烷甲巨病IgG抗體

恥垢分枝桿六氫噠皰疹病-6型感染

深綠木霉 2.4-二嘧啶-5-甲酰皰疹病-6型感染IgG抗體

大腸埃希 2-氨基-6-氟三氟甲苯皰疹病-6型感染IgM抗體

米曲霉 N,N-雙[3-(甲氨基)基]皰疹病-7型感染

產(chǎn)氣莢膜梭 D型 5-甲氧基噠-3-酮皰疹病-7型感染IgG抗體

薄邊蜂窩孔 N,N',N'',N'''-四甲基三撐四皰疹病-7型感染IgM抗體

黑曲霉 4-苯基-1-羧叔丁酯卡波氏肉瘤相關(guān)皰疹病

銅綠假單胞硫氧化釩(IV) (metals basis)卡波氏肉瘤相關(guān)皰疹病IgG抗體

果生鏈核盤對(duì)甲苯磺鋅卡波氏肉瘤相關(guān)皰疹病IgM抗體

四川散斑殼 4-溴-2--3-氟EB病

針層孔屬 2-甲氧基吡啶-4-甲因子復(fù)合

擬可可毛球二孢水合物腫瘤壞死因子

乳乳球乳脂亞種 2-溴-6-基吡啶DNA甲基轉(zhuǎn)移3A

釀酒酵母 1-Cbz-4-羥甲基DNA甲基轉(zhuǎn)移3B
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)