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| 貨號 | FS-X9544 |
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中文名稱：Caspase 8 活性檢測試劑盒
英文名稱：Caspase 8 Activity Assay Kit
產品規格：20次|100次
貨號：FS-X9544
產品介紹:
本試劑盒是采用分光光度法檢測細胞或組織裂解液中caspase 8酶活性或純化的caspase 8酶活性的試劑盒。本試劑盒用酶標儀檢測或容量不超過100μl的分光光度檢測杯檢測時，除標準曲線外可以檢測20個樣品。 Caspase是一個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 8也稱FLICE、MACH或Mch5，有時被寫作caspase-8或caspase 8，通常以酶原的形式存在，在細胞凋亡的信號轉導過程中被激活。Caspase 8被認為是細胞凋亡信號轉導過程中比較上游的一個caspase。在Fas-receptor和TNFR-1介導的細胞凋亡過程中caspase 8被激活，形成一個由p18和p10組成的二聚體，進一步激活下游的caspase 4，caspase 6，caspase 9和caspase 10。 本Caspase 8活性檢測試劑盒是基于caspase 8可以催化底物Ac-IETD-pNA(acetyl-Ile-Glu-Thr-Aspp-nitroanilide)產生黃色的pNA(p-nitroaniline)，從而可以通過測定吸光度來檢測Caspase 8的活性。pNA在405nm附近有強吸收。 試劑盒中提供了caspase 8催化產生的黃色產物pNA，可以作為定量caspase 8酶活性的標準品。 試劑盒組分： 裂解液——————8ml 檢測緩沖液——————8ml Ac-IETD-pNA(2mM)———200μl pNA(10mM)——————200μl 儲存條件：-20℃。 |
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
信號傳導轉錄激活因子3(STAT3)elisa檢測試劑盒 英文名稱：STAT3 ELISA Kit，STAT3，
腺suan環化mei8(ADCY8)elisa檢測試劑盒 英文名稱：ADCY8 ELISA Kit，ADCY8，
纖維蛋白肽A(FPA)elisa檢測試劑盒 英文名稱：FPA ELISA Kit，FPA，
MAX二聚化蛋白1(mxd1)elisa檢測試劑盒 英文名稱：mxd1 ELISA Kit，mxd1，
CD117分子(CD117)elisa檢測試劑盒 英文名稱：CD117 ELISA Kit，CD117，
DNAjia基轉移mei1(DNMT1)elisa檢測試劑盒 英文名稱：DNMT1 ELISA Kit，DNMT1，
AFG3樣蛋白2(AFG3L2)elisa檢測試劑盒 英文名稱：AFG3L2 ELISA Kit，AFG3L2，
6tong前列腺suF1a(6-keto-PGF1a)elisa檢測試劑盒 英文名稱：6-keto-PGF1a ELISA Kit，6-keto-PGF1a，
12羥二十烷四烯suan(12-HETE)elisa檢測試劑盒 英文名稱：12-HETE ELISA Kit，12-HETE，
神經趨化蛋白(fractalkine/CX3CL1)elisa檢測試劑盒 英文名稱：fractalkine/CX3CL1 ELISA Kit，fractalkine/CX3CL1，
白細胞介su3(IL-3)elisa檢測試劑盒 英文名稱：IL-3 ELISA Kit，IL-3，
組織蛋白meiZ(CTSZ)elisa檢測試劑盒 英文名稱：CTSZ ELISA Kit，CTSZ，
轉運蛋白1(TNPO1)elisa檢測試劑盒 英文名稱：TNPO1 ELISA Kit，TNPO1，
肘臀蛋白(CUBN)elisa檢測試劑盒 英文名稱：CUBN ELISA Kit，CUBN，
肺耐藥蛋白(LRP)elisa檢測試劑盒 英文名稱：LRP ELISA Kit，LRP，
低氧誘導因子3α(HIF-3α)elisa檢測試劑盒 英文名稱：HIF-3α ELISA Kit，HIF-3α，
多聚腺二磷suan核糖聚合mei(PARP)elisa檢測試劑盒 英文名稱：PARP ELISA Kit，PARP，
Caspase 8 活性檢測試劑盒鹽suan布酚寧標準品 規格:200mg 英文名稱：Nylidrin Hydrochloride
沙坦酯雜質A標準品 規格:20mg 英文名稱：
維生suK1標準品 規格:500mg 英文名稱：Phytonadione (Vitamin K1)
黑升麻提取物標準品 規格:1．5g 英文名稱：Powdered Black Cohosh Extract
鄰ben二jiasuan二丁酯標準品 規格:200mg 英文名稱：Dibutyl Phthalate
刺五加粉末提取物標準品 規格:1．5g 英文名稱：Powdered Eleuthero Extract
紫錐菊粉末提取物標準品 規格:1g 英文名稱：
酞suan二乙酯標準品 規格:200mg 英文名稱：Diethyl Phthalate
標準品 規格:200mg 英文名稱：Temazepam CIV
勞拉標準品 規格:200mg 英文名稱：Lorazepam CIV
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