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APX抗壞血酸過氧化物酶檢測試劑盒微量法

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所  在  地上海市

更新時間:2022-04-11 11:38:01瀏覽次數:162次

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貨號 FS-01S63284
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檢測方法

貨號

APX抗壞血酸過氧化物酶檢測試劑盒微量法

100管/96樣

微量法

FS-01S63284

商品介紹:

測定意義

APX是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一,也是抗壞血酸代謝的關鍵酶之一。APX具有多種同功酶,分別定位于葉綠體、胞質、線粒體、過氧化物和乙醛酸體,以及過氧化體和類囊體膜上。APX 催化H2O2氧化AsA,是植 AsA 的主要消耗者。APX的活性直接影響到AsA的含量,APX與AsA具有一定的負相關性。

測定原理:

APX 催化催化H2O2氧化AsA,通過測定AsA氧化速率,來計算得APX活性。

自備儀器用品:

低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、移液槍、研缽、冰和蒸餾水。

樣本前處理步驟:
樣本處理前須知

處理任何樣本時,都必須注意:

(1) 實驗中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時要更換吸頭(2)實驗前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時對實驗器具進 行清潔,避免污染干擾實驗結果。

(a)組織樣品處理方法:

1、 稱取5±0.05g組織樣品于50ml離心管中,先加入3ml已稀釋好的樣品提取液震蕩2min;再加入10ml乙腈,充分震蕩5min,

2、 加入2g中性氧化鋁;震蕩2min ,室溫4000r/min以上,離心10min;;

3、 取6ml上清液于干凈離心管中,加入5ml二氯甲烷震蕩3min ,室溫4000r/min以上,離心10min;;

4、 取下層清澈液體于玻璃管中,加入20ul氧化劑混勻,在56℃條件下氮氣或空氣流吹至*干燥;

5、 加入1ml復溶液,充分溶解干燥殘留物。

6、 取100ul 上清液與100ul 已稀釋好的復溶液充分混合30s,

7、 取50ul進行分析。

樣本稀釋倍數: 1倍

(b)水樣品處理方法:

1、取50ul 上清液與450ul 已稀釋好的復溶液充分混合30s,

2、取50ul進行分析。

樣本稀釋倍數:10倍

 

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實驗通用規則:
1、將液體加到酶標孔中時,避免槍頭和孔內液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。

2、用槍吸取液體時速度不能太快,以免產生氣泡而使吸取量不準確。

3、溫浴時,要用不干膠或膠帶紙封好酶標板,防止水分的蒸發。

4、洗液不夠時,可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。

5、實驗時,要使底物避光保存。

6、洗板時,每次洗液加入后,應靜置1分鐘,使清洗更加*。沒有洗板機時,倒去液體后,要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。

7、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復到室溫,以使結果更穩定。

8、吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。

9、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,要更換槍頭。即使是吸取標準品時。

10、液體全部加完后,可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。


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