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| 貨號 | FS-01S63268 |
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公司產品僅用于科研提供的生化試劑盒，質量信得過產品，售后完善。服務于高校及免疫學科研單位，竭誠為您提供更周到的服務更優質的產品。
規格：100管/96樣
檢測方法：微量法
貨號：FS-01S63268
商品介紹：
測定意義 TPX屬于過氧化物酶家族，在體內主要通過還原過氧化氫和一些氫過氧化物來實現抗氧化作用，功能與GPX類似，也是氧化還原循環關鍵酶之一。TPX普遍存在于各種生物體內，酵母、植物、動物、原生動物、寄生蟲甚至細菌和古細菌體內都含有該酶，在進化上高度保守。TPX與細胞增殖、分化、細胞凋亡及腫瘤發生調控密切相關。TPX的主要功能包括細胞脫毒、抗氧化和調節由過氧化氫介導的信號轉導和免疫反應。 測定原理： TPX催化H2O2氧化二硫蘇糖醇（DTT），H2O2的吸收波長為240nm，通過測定240nm波長處吸光度的下降速率，即可計算出TPX活性。 需自備的儀器和用品： 紫外-可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、3ml石英比色皿、雙蒸水 |
操作步驟:
實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。 1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。 2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。 3. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。 4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。 5. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。 6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。 7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。 8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進行檢測。 |
粗酶液提取：
1、細胞或組織樣品的制備： 培養細胞：先收集細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細胞數量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。 2、血清（漿）樣品：直接檢測。 |
試劑的組成和配制：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 200μL×1 支，4℃保存；
試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；
試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。
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