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伊紅染液

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-11 15:15:23瀏覽次數:180次

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貨號 FS-X9800
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培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱:伊紅染液

英文名稱:

產品規格:100ml

貨號:FS-X9800

產品介紹:

伊紅為一種紅色的酸性染料,可將細胞質和細胞間質染為粉紅色。水溶性伊紅組織學上用于上皮細胞、肌肉纖維和細胞漿染色。微生物學實驗中,用于鑒別產酸性細菌的一種培養基添加劑。

染色的時間長短需依據:染劑對細胞、組織的染色作用,室溫條件,涂片厚薄等進行調節。所以在染色時必須使用顯微鏡觀察染色程度以利掌握時間。

操作方法

1. 涂片放空氣中自然干燥,甲醇固定5 分鐘,自來水小水流洗去固定液。

2. 滴加伊紅染液染色2 分鐘,流水洗去多余染液,濾紙吸干水分,鏡檢。

3. 鏡檢結果:胞漿呈紅色,紅細胞呈桔紅色,其它成分呈深淺不同紅色。

儲存:室溫避光,有效期一年。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

分泌型卷曲相關蛋白4(SFRP4)英文名:SFRP4 分裂周期蛋白7抗體包裝500mg

分泌型卷曲相關蛋白2(SFRP2)英文名:SFRP2 磷化分裂周期蛋白25抗體包裝1g

分泌型卷曲相關蛋白1(SFRP1)英文名:SFRP1 分裂周期蛋白25B抗體包裝5g

分泌粒蛋白Ⅱ(SCG2)英文名:SCG2 磷化CD244抗體包裝250g

肺部激活調節趨化因子(PARC)英文名:PARC 神經元電壓門控鈣通道γ3/L-type Ca++CP γ3抗體包裝50g

腓骨蛋白7(FBLN7)英文名:FBLN7 3號染色體開放閱讀框25抗體包裝1g

肥胖抑制(OB)英文名:OB 轉錄激活因子MYB抗體包裝1g

肥大細胞類糜蛋白1(CMA1)英文名:CMA1 陽離子通道相關蛋白1抗體包裝1g

防御β2(DEFβ2)英文名:DEFβ2 1號染色體開放閱讀框222抗體包裝1g

防御β1(DEFβ1)英文名:DEFβ1 2號染色體開放閱讀框15抗體包裝1g

防御α5(DEFα5)英文名:DEFα5 骨架相關蛋白4抗體包裝25g

防御α1(DEFα1)英文名:DEFα1 肌肽二肽1抗體包裝5g

芳香烴受體核轉位因子(ARNT)英文名:ARNT 性線粒體肌激抗體包裝10g

芳香烴受體(AhR)英文名:AhR 碳酐相關蛋白8抗體包裝25g

泛結合E2A(UBE2A)英文名:UBE2A 鈣通道電壓依賴性β1蛋白抗體包裝5g

大腸埃希菌Escherichia│coli 質量規格:≥930μg/mg,BR,可用于培養載脂蛋白A1試劑盒8-氧黃連堿 ;

: Vi-1,8382資源名稱: 傷門氏菌 質量規格:效價測定運狀腺蛋白/前白蛋白試劑盒異澤蘭黃;Eupatilin

大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質量規格:純度大于97%含量84.0-102%,USP30孕烯試劑盒異橙黃;Isosinensetin;3
伊紅染液停乳鏈球 1-Boc-2-基吡咯烷絲蛋白抑制因子1

黑曲霉 5-溴-2-甲氧基苯甲松弛肽2;松弛2

黑曲霉變種 N-乙基琥珀酰亞UDP葡糖基轉移1家族多肽A1

葡枝根霉 2-甲氧羰基-5-苯磺酰登革熱病NS1抗原

玫瑰綠色鏈霉 1,2,3,4-四氫異喹啉-6-金屬肽含血小板反應蛋白13

根瘤 9-癸烯C1q腫瘤壞死因子相關蛋白9

熒光假單胞 4,8-雙(5-(2-丁基辛基)噻吩-2-基)苯并[1,2-b:4,5-b']二噻吩抗人類缺陷病抗體

金黃色葡萄球 4-氨基-5-溴嘧啶硫肝糖蛋白

紅酵母屬 3-溴鄰苯二酚纖維蛋白原抗體

雙歧雙歧桿 2-氨基-5-羥基嘧啶N末端B型鈉尿肽

土曲霉 3-溴-4-羥基輔Q10

膜醭畢赤酵母 4-溴-3-羥基酮

球毛殼 6-溴-7-氮雜心臟肌球蛋白結合蛋白C

Bacillus tequilensis 油泛交叉反應蛋白

大腸桿 三甘單丁可溶性白抗原-E
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

 


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