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當前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞組織染色>> 內質網紅色熒光探針(ER-Tracker Red)
| 貨號 | FS-X9802 |
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中文名稱：內質網紅色熒光探針(ER-Tracker Red)
英文名稱：
產品規(guī)格：20μL
貨號：FS-X9802
產品介紹:
ER-Red 染料是細胞滲透性的活細胞染料，對內質網(ER) 有高度選擇性；如用手冊提供的方法進行染色，染色圖案在固定后部分保留。該染料含綠色熒光BODIPY:emoji: TR 染料。（優(yōu)降糖）能結合到內質網上突出的ATP-敏感K+ 通道的磺脲類受體上；藥理學活性可能影響內質網功能。某些特化細胞中磺脲類受體的可變表達可能導致非內質網標記。 濃度：1mM in DMSO 分子式：C44H42BClF2N6O7S2 分子量：915.2316 建議工作濃度：1μM 儲存：-20℃，避光，有效期6個月。 |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
腭/肺/鼻上皮癌關聯蛋白(PLUNC)英文名：PLUNC 19號染色體開放閱讀框80抗體包裝100g
多效生長因子(PTN)英文名：PTN 半胱雙加氧1抗體包裝25g
多配體蛋白聚糖1(SDC1)英文名：SDC1 膠原蛋白11A2抗體包裝5g
多聚免疫球蛋白受體(PIGR)英文名：PIGR CUL4B蛋白抗體包裝1g
多聚蛋白2(MMRN2)英文名：MMRN2 1號染色體開放閱讀框103抗體包裝5g
多功能肽2(LMP2)英文名：LMP2 凋亡抑制因子2抗體包裝25g
多功能蛋白聚糖(VS)英文名：VS 促腎上腺皮質激釋放激結合蛋白抗體包裝5g
多巴胺轉運蛋白(DAT)英文名：DAT 3號染色體開放閱讀框23抗體包裝1g
多巴胺受體D4(DRD4)英文名：DRD4 瓜環(huán)肽抗體包裝25g
多巴胺受體D3(DRD3)英文名：DRD3 分裂核仁蛋白1抗體包裝5g
多巴胺受體D1(DRD1)英文名：DRD1 鈣/鈣調蛋白依賴性蛋白激4抗體包裝1g
多胺氧化(PAOX)英文名：PAOX 磷化鈣/鈣調蛋白依賴性蛋白激4抗體包裝25g
對氧磷2(PON2)英文名：PON2 膠原蛋白4a2亞基抗體包裝5g
對氧磷1(PON1)英文名：PON1 CD161c抗體包裝100g
端粒關聯蛋白1(TEP1)英文名：TEP1 補體C1r鏈多肽抗體包裝25g
根瘤菌(紫云英)Mesorhizobium│sp. 質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品孕激/孕試劑盒野馬追內酯A;Eupalinolide
: ivcas7.01221資源名稱: 蕈狀芽胞桿菌 質量規(guī)格：>97%,進分sigma貨號A3656 鑰孔蟲戚血藍蛋白試劑盒乙氧基白屈菜紅堿; 5-Ethoxych
: 65092442資源名稱: 羊布氏菌 質量規(guī)格：>99%,BR鑰孔蟲戚血藍蛋白試劑盒異夏佛塔;Isoschaftoside
內質網紅色熒光探針(ER-Tracker Red)水單胞 4-哌酪抗體
鏈格孢 2-氧化-6-甲甲酯酪
枯草芽孢桿 2-[[叔丁氧羰基]甲基氨基]發(fā)熱伴血小板減少綜合征
香蕉 磺酰磺視神經蛋白
密蘇里游動放線 磺磺隆p62
大腸埃希氏 S-3-BOC-氨甲基吡咯烷S100鈣結合蛋白A8
類干酪乳桿 N,N-二甲基-4-((E)-4-((E)-(4-硝基亞芐基)氨基)苯乙烯基)苯普列克底物蛋白
管毛殼 2-Boc-六氫吡咯并[3,4-c]吡咯前纖維蛋白1抗體
鏈霉屬 3,5-二溴-4-羥基吡啶14-3-3家族z蛋白
淡紫紫霉 alpha-溴-2-可替寧
黃色直絲鏈霉 4-氟-3-甲氧基溴芐甘膽
黑木耳 4-噻吩[2,3-D]嘧啶阿法骨化
假單胞 噻吩并[2,3-D]嘧啶-4(3H)-酮磷化p38絲裂原活化蛋白激
短小芽孢桿 羥乙磺噴他瞇縮宮
秦氏蜜環(huán) 4-甲硫基乙酯曼氏裂頭蚴IgG抗體
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