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Goldner三色染色液

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-16 14:21:22瀏覽次數:231次

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貨號 FS-X9946
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產品介紹:

用途:

又稱戈德納三色染色液,主要用于骨組織染色。

注意事項:

可不脫鈣染色,可用MMA塑料包埋,脫塑后直接染色。

儲存條件:室溫,避光,12個月

中文名稱:Goldner三色染色液

英文名稱:

產品規格:6×50ml|6×100ml

貨號:FS-X9946

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

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葡萄座腔菌膽固24羥化抗體Human FAM50A 兔子狀瘤病16型衣殼蛋白L1抗體(IgG)免疫試劑盒

克氏梭菌Clostridium│kluyveri 質量規格:>98%,BRT活化連接蛋白試劑盒派立辛

絲膜菌屬Cortinarius│sp. 質量規格:>98%,BRT表面糖蛋白CD1a試劑盒尼泊金異酯

曲霉Aspergillus│oryzae 質量規格:>99%,BRT淋巴白血病病Ⅰ/II試劑盒尼泊金異丁酯
Goldner三色染色液枯草芽孢桿 (4-甲氧基苯基)(4-)甲酮鹽鹽低氧誘導因子α

白假絲酵母 [1,3-二氫-1,3-雙(2,4,6-三基)-2H-咪唑-2-亞基](3-苯基-1H-茚-1血紅加氧

銳齒櫟蛙眼 1,5-萘啶發燒伴血小板削減綜合征病

沙阿霉鏈霉 三立克次體抗體IgM

金黃色葡萄球金黃亞種 紫紅-18漢坦病IgG抗體

腸膜明串珠 1,8-萘啶包柔氏螺旋體IgM抗體

假單胞 六釕(III),Premion包柔氏螺旋體IgG抗體

大腸埃希氏 3-甲氧基半胱蛋白12

鴨疫里氏桿 (4-甲氧基芐氧基)乙S100鈣結合蛋白P

農球 2--3-甲氧基12羥二十烷四烯

溶桿 吩-1-羧沙門氏

微白黃鏈霉 二[1,3-雙(2,4,6-三基)-2-咪唑烷亞基](3-甲基-2-亞基)(三環己基膦)磷甘油變位2

糞腸球 3-乙氧基-4-甲氧基-alpha-[(甲基磺酰基)甲基]-苯Y一谷氨酞轉膚

平菇 (R)-1-N-Boc-哌-2-甲甲酯GTP活化蛋白

鏈霉 2'--4'-溴苯乙酮發燒伴血小板削減綜合征病抗體

 


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