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六胺銀染色液(改良Grocott-橙黃G法)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-16 16:20:05瀏覽次數:193次

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貨號 FS-X10148
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產品介紹:

用途:

用于真菌(馬爾尼菲青霉菌)和卡氏肺囊蟲類生物的染色

注意事項:

固定,石蠟包埋。真菌、肺囊蟲、黑色素染為棕黑色或黑色,背景為橙黃色。

儲存條件:4℃,避光,6個月

中文名稱:六胺銀染色液(改良Grocott-橙黃G法)

英文名稱:

產品規格:5×50ml

貨號:FS-X10148

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

葡萄汁有孢漢遜酵母FAM151A蛋白抗體Human B3GAT1 (Galactosylgalactosylxylosylprotein 3-beta-glucuronosyltransferase 1) 牛N端前腦鈉(NT-proBNP)免疫試劑盒

復輪生小克銀漢霉跨膜蛋白29抗體Human BCO1 (Beta,beta-carotene 15,15′-dioxygenase) 牛D-乳免疫試劑盒

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阿姆斯特丹曲霉延胡索酰乙酰乙水解抗體Human BFSP1 (Filensin) 綿羊

枯草芽孢桿菌枯草亞種FAM101A蛋白抗體Human BSCL2 (Seipin) 綿羊組(HIS)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌FAM102B蛋白抗體Human ATG9B (Autophagy-related protein 9B) 綿羊腫瘤壞死因子α(TNF-α)免疫試劑盒

黑曲霉FAM104B蛋白抗體Human BRI3BP (BRI3-binding protein) 綿羊中性粒明膠相關脂質運載蛋白(NGAL)免疫試劑盒

谷棒桿菌腎癌下調蛋白1抗體Human ATP2A1 (Sarcoplasmic/endoplasmic reticulum calcium ATPase 1) 綿羊脂聯(ADIPOQ)免疫試劑盒

*百脈根根瘤菌8/第八/第八因子相關抗原抗體Human ABCA4 (Retinal-specific ATP-binding cassette transporter) 綿羊孕受體(PGR)免疫試劑盒

托湖萊茵海默氏菌胎盤葉受體蛋白2抗體Human ABCB11 (Bile salt export pump) 綿羊孕激/孕(PROG)免疫試劑盒

地衣芽胞桿菌Bacillus│licheniformis 質量規格:standard for GC, ≥99.5% (GC)牛血清白蛋白V

鹽田菌Salinicola│sp. 質量規格:analytical standard,≥99.5%(GC)牛磺膽鈉

#多主殼菌Botryosphaeria│ribis Grossenb. & Duggar 質量規格:GC,>99.5%(GC)
六胺銀染色液(改良Grocott-橙黃G法)惡臭假單胞 2-氟半胱蛋白抑制劑;胱抑C

桃色枝頂孢 4-氟天冬蛋白抑制劑

橘色硬皮馬勃 3-氟S1核

Escherichia 吲唑-3-羧刀豆A

馬克斯克魯維酵母 2--4,6-二甲基嘧啶雌二

磚紅鐮孢 2-氟苯甲基溴孕酮

豬鏈球 2,4,5-三氟環腺二磷核糖

花蓋紅菇 5-氟脫鎂葉綠a氧化

膠質肉座 (甲氧基)二苯基磷氧谷轉氨

根瘤 甲硫基乙乙酯葡聚糖

阪崎腸桿 2-氟羧甲基賴

細鏈格孢 2-環己基乙多聚半乳糖

木生假絲酵母 2,3-二氫-1,4-苯并二烷-5-羧二烯氧化物環化

釀酒酵母 3-(4-嗎啉)-1-l2一氧一植物二烯還原

Glaciihabitans 2-氟-6-髓過氧化物

 


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