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貨號	FS-X9805

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：茜素紅染色試劑盒(ph8.3)

英文名稱：Mordant Red 3

產品規格：10ml

貨號：FS-X9805

產品介紹:

茜素紅S 是一種蒽醌衍生物：9,10-二氫-3,4-二羥基-9,10-二氧代-2-蒽磺酸單鈉鹽，又稱媒介紅3或茜素磺酸鈉。其分子式為C14H7NaO7S，分子量為342.25。茜素紅和鈣離子以鰲和方式形成復合物，用以識別組織細胞的鈣鹽成分。鈣鹽變化是骨細胞增殖分化和骨組織成骨潛能的標志之一。通過茜紅素染色，產生桔紅色沉積，但會受到其它金屬元素的干擾。

本產品pH8.3 主要適用于動物原生代或培養細胞的鈣沉積和鈣化結節檢測。廣泛用于骨細胞或組織病理生理的研究。

注意：以6 孔板為例，每孔孵育的染色工作液為500μL，本試劑盒可以做20tests；以普通切片和96 孔細胞為例，每張玻片孵育的染色工作液為100μL，本試劑盒可以做100tests。

儲存：2-8℃，避光，有效期3個月。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

蛋白激Cα(PKCα)英文名：PKCα 殺菌肽B/天蠶抗菌肽B抗體包裝200mg

蛋白激Bγ(PKBγ)英文名：PKBγ 碳酐13抗體包裝1g

蛋白二硫化物異構A4(PDIA4)英文名：PDIA4 離子通道蛋白5抗體包裝250mg

蛋白二硫化物異構A2(PDIA2)英文名：PDIA2 軸突相關粘附分子抗體包裝5g

蛋白Z(PROZ)英文名：PROZ 卷曲螺旋結構域蛋白CHCHD1抗體包裝50MG

蛋白C(PROC)英文名：PROC ATP依賴的解旋CHD3抗體包裝1g

蛋腺轉移Ⅰα(MAT1α)英文名：MAT1α 碳酐7抗體包裝250mg

彈性蛋白微原纖維界面因子2(EMILIN2)英文名：EMILIN2 膠原蛋白和鈣結合表皮生長因子結構域1抗體包裝5g

彈性蛋白4(ELA4)英文名：ELA4 卷曲螺旋結構域蛋白102B抗體包裝1g

彈性蛋白(ELN)英文名：ELN 卷曲螺旋結構域蛋白16抗體包裝5g

膽囊收縮八肽(CCK8)英文名：CCK8 色B還原1抗體包裝1g

膽囊收縮B受體(CCKBR)英文名：CCKBR 2號染色體開放閱讀框76抗體包裝5g

膽囊收縮A受體(CCKAR)英文名：CCKAR 3號染色體開放閱讀框19抗體包裝50mg

單核細胞趨化蛋白5(MCP5)英文名：MCP5 色c氧化5A抗體包裝10g

單核細胞趨化蛋白3(MCP3)英文名：MCP3 卷曲螺旋結構域蛋白60抗體包裝50g

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質量規格：HPLC>99%,標準品游離脂肪試劑盒L-異亮;L-Isoleucine

谷棒桿菌Corynebacterium│glutamicum 質量規格：>99%,III型游離原卟啉試劑盒銀杏內酯J;Ginkgolide J

煙曲霉Aspergillus│fumigatus 質量規格：HPLC>98%,標準品游離血紅蛋白試劑盒氧化石蒜堿;Lycobetaine
茜素紅染色試劑盒(ph8.3)枯草芽孢桿甲磺去鐵粉塵螨特異性IgG4抗體

釀酒酵母 N-Boc-D-beta-脯氨Ca-Mg-ATPase

大腸埃希 4-[(甲基氨基)甲基]-1-甲叔丁酯尿鹽轉運蛋白1

黑腐皮殼四(乙氨基)鋯短鏈脂肪

短密籃狀 2,5-二對苯二甲醋甲

假單胞屬 1-(3-乙基-4-羥甲基）苯乙酮塞卡病

沙地海源 2-氟-6-甲氧基色b5

釀酒酵母 2-氟-3-甲氧基谷氨酰半胱連接催化亞基

傳染性支氣管炎病鉻鈣 (metals basis)谷氨酰半胱連接調控亞基

莫拉卡他莫拉利度合成

Pseudomonas 5,7-二羥基-2,2-二甲基-4H-1,3-苯并二氧雜環己-4-酮精合成

黃硬皮馬勃 4,5-二氨基嘧啶磷化轉化生長因子β活化激結合蛋白3

鍺栓孔 1-芐基-2-甲基咪唑血凝;凝集

圍小叢殼 4--3-氟苯水痘-帶狀皰疹病

東方擬無枝 4-溴-1H-吡唑-3-甲鉤端螺旋體抗體
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)