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貨號	FS-X10034

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：改良Harris蘇木素染色液

英文名稱：

產品規格：100ml|500ml

貨號：FS-X10034

產品介紹:

用途：

屬于常規切片HE染色的明礬蘇木素的一種，適用于細胞核染色，尤其適用于臨床紙片染色。

注意事項：

Harris蘇木素染色中leagene推薦采用該試劑。細胞核染色的選擇性和保存時間優于Harris蘇木素染色液，對細胞核染色較深，染色一般5-8分鐘，存儲太久后，使用時應過濾。

儲存條件：室溫，12個月

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

格氏乳球菌凋亡加強結構域蛋白9抗體Human ASGR2(Asialoglycoprotein Receptor 2) 人蘭尼堿受體2(RYR2)免疫試劑盒

脫皮毛球馬勃*膽固氧化抗體Human ASK-1(Apoptosis Signal Regulating Kinase 1) 人蘭尼堿抗體免疫試劑盒

金灰青霉半胱蛋白蛋白14抗體Human AP17(Apelin 17) 人賴酰氧化免疫試劑盒

香菇半胱蛋白蛋白5抗體Human AP13(Apelin 13) 人賴特異性脫甲基5A(JARID1A)免疫試劑盒

黑曲霉豬瘟病抗體Human AP(Allopregnanolone) 人醌NADH脫氫1(NQO1)免疫試劑盒

蒼白桿菌屬豬瘟病抗體Human ANG II R1-Ab(Angiotensin II Receptor 1 Antibody) 人跨膜結構域4亞家族成員11(MS4A11)免疫試劑盒

灰黃鏈霉菌嗜鉻粒蛋白C抗體Human ANG II(Angiotensin II) 人空泡相關蛋白A(VacA)免疫試劑盒

巴氏醋桿菌煙堿型乙酰受體α10/AChRα10抗體Human ANGPTL1(Angiopoietin Like Protein 1) 人空腸彎曲菌(CJ)抗體(IgM)免疫試劑盒

大腸埃希菌煙堿型乙酰受體α6/AChRα6抗體Human ANGPTL6(Angiopoietin Like Protein 6) 人空腸彎曲菌(CJ)抗體(IgG)免疫試劑盒

釀酒酵母煙堿型乙酰受體α9/AChRα9抗體Human Ang III(Angiotensin III) 人克雷白氏桿菌(klebsiella)免疫試劑盒

木拉克酵母屬煙堿型乙酰受體δ/AChRδ抗體Human Anti-Surv(Anti-Survivin Antibody) 人克拉拉蛋白(CC16)免疫試劑盒

植物乳桿菌凋亡加強結構域蛋白8抗體Human ANKRD1(Ankyrin Repeat Domain 1) 人可溶性轉鐵蛋白受體(sTfR)免疫試劑盒

耐熱鹽土生古菌凋亡加強結構域蛋白7抗體Human AP(Allopregnanolone) 人可溶性腫瘤壞死因子受體2(sTNF-R2)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌枯草亞種β衣被蛋白抗體Human AP17(Apelin 17) 人可溶性血小板內皮粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)免疫試劑盒

紋黑蛋巢半胱蛋白4/11抗體Human ATF-1(Activating Transcription Factor 1) 人可溶性血纖蛋白單體復合物(SFMC)免疫試劑盒

樟疫霉1號染色體開放閱讀框187抗體Human AP13(Apelin 13) 人可溶性血管內皮蛋白C受體(sEPCR)免疫試劑盒

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質量規格：D,99.8%Ⅲ型前膠原肽試劑盒半枝蓮堿

南方鹽單胞菌Halomonas│meridiana 質量規格：for HPLC,≥99.0%Ⅲ型前膠原基末端肽試劑盒白芷屬腦

死谷芽孢桿菌Bacillus│vallismortis 質量規格：for HPLC, ≥99.7%Ⅲ型前膠原基端肽試劑盒Α-波菜甾
改良Harris蘇木素染色液矢野氏鞘氨單胞 3,5-二甲基-4-甲氧基苯乙酮纖維蛋白原β

云芝栓孔 (變色栓) N-甲基高哌-2-酮CD86分子

陰溝腸桿 2-甲基-5-氨基-2H-吲唑PSTAT6

盤長孢狀盤孢 2--2',5'-二氟苯乙酮PASTAT1

大腸埃希 Amberlite XAD-1180N 非離子型多孔樹脂小泛相關修飾蛋白2

被孢霉屬 2,5-二氟苯肼核仁蛋白

食物中殼成分速測卡 17alpha-羥基血清

空腸彎曲桿 2-羥基-5-甲神經絲蛋白輕鏈

橘青霉 3-氨基-1-芐基血吸蟲IgM抗體

毛柄(金針菇) 2-氟-4-甲氧酰苯鼠相關蛋白

大腸埃希氏 2,5-二吡啶-4-甲乙酯WNT抑制因子1

干酪乳桿酮血小板因子4變體

雜色曲霉 2--3-氟苯甲含NLR家族CARD域蛋白3

鉛色青霉 1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7,10-四乙綠色熒光蛋白

大麗輪枝孢 2,6-二氟苯磺酰,97%巨蛋白抗體
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)