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| 貨號 | FS-X9825 |
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產品介紹:
細胞凋亡時產生顯著的變化是染色體固縮，DNA 裂解使細胞核形態產發生變化。本試劑盒提供的熒光染料Hoechst 33258 是一種無毒、水溶性雙苯咪唑類化合物，可作為熒光探針與DNA 分子結合。 在凋亡細胞中，細胞膜對Hoechst 33258 的攝取增高，并且由于染色體高度濃縮，Hoechst 33258 與之結合增強，染色呈強藍色熒光，而正常細胞只呈微弱熒光，死細胞則不被染色，由此可檢測出凋亡。 操作方法 1. 用適當的方法誘導細胞凋亡； 2. 用冷Buffer A 洗滌細胞二次，離心收集106 細胞于1.5mL 微量離心管中；（貼壁細胞原位固定染色） 3. 加入1mL 的4%溶液(用戶自備)，4℃固定細胞10min； 4. 離心去固定液，用Buffer A 洗兩遍；離心后留50～100μL Buffer A 重懸細胞； 5. 取上步驟50～100μL 細胞懸液涂片，自然晾干； 6. 滴加100μL Hoechst 33258 工作液（備注1），室溫染色10 min，水沖凈晾干； 7. 以紫外光340nm 波長激發，熒光顯微鏡下觀察。 儲存：2-8℃，避光，有效期一年。 |
中文名稱：Hoechst33258染色試劑盒
英文名稱：Apoptotic Cell Hoechst 33258 Detection Kit
產品規格：100T
貨號：FS-X9825
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
B-細胞κ-輕肽基因增強子抑制因子激β(IκBKβ)英文名：IκBKβ 胃癌多藥耐藥相關蛋白包裝5g
B-淋巴細胞趨化因子1(BLC1)英文名：BLC1 酪蛋白激casein kinase Iα抗體包裝1g
B-淋巴細胞激活抗原B7-2(LAB7-2)英文名：LAB7-2 磷化酪蛋白激casein kinase Iα抗體包裝1g
BMP結合內皮調節因子(BMPER)英文名：BMPER 磷化酪蛋白激casein kinase Iα抗體包裝5g
BH3相互作用域死亡激動劑(Bid)英文名：Bid 肌動蛋白調節蛋白CAPG抗體包裝5MG
Bcl2相關髓細胞白血病序列1(MCL1)英文名：MCL1 Ⅰ型膠原/1型膠原a1抗體包裝100mg
Bcl2關聯X蛋白(Bax)英文名：Bax Ⅲ型膠原蛋白/膠原蛋白3/3型膠原蛋白抗體包裝25mg
A類清道夫受體3(SCARA3)英文名：SCARA3 CD96抗體包裝1g
ATP結合盒轉運蛋白G2(ABCG2)英文名：ABCG2 貓眼綜合征染色體候選基因2抗體包裝25g
ATP結合盒轉運蛋白C6(ABCC6)英文名：ABCC6 1號染色體開放閱讀框146抗體包裝5g
ATP結合盒轉運蛋白A1(ABCA1)英文名：ABCA1 1號染色體開放閱讀框150抗體包裝100g
Apelin13蛋白(AP13)英文名：AP13 1號染色體開放閱讀框156抗體包裝25g
Apelin12蛋白(AP12)英文名：AP12 1號染色體開放閱讀框159抗體包裝5g
Apelin蛋白(APLN)英文名：APLN 1號染色體開放閱讀框162抗體包裝5mg
AMPA離子能谷受體4(GRIA4)英文名：GRIA4 1號染色體開放閱讀框163抗體包裝1g
解脂耶羅威亞酵母Yarrowia│lipolytica 質量規格：>98.5%,BR 乙酰酯試劑盒洋川芎內酯I;Senkyunolide
刺黑烏霉菌Memnoniella│echinata 質量規格：HPLC>98%,標準品乙酰受體抗體試劑盒洋川芎內酯H;Senkyunolide
秦氏蜜環菌Armillaria│qinii H.C. Wang & J. Zhao 質量規格：含量960~1030µg/mg,USP30乙酰試劑盒洋川芎內酯A;Senkyunolide
Hoechst33258染色試劑盒沙門氏馬凝集試驗抗原 5-氨基-3-甲基-1-苯基吡唑卵清蛋白
枯草芽孢桿 2-溴-3-甲氧基苯高遷移率族蛋白B1-IgG抗體
蘇云金芽孢桿庫爾斯塔克亞種 3-, 98+%高遷移率族蛋白B1-IgM抗體
產克雷伯氏 1-環基-6,7-二氟-1,4-二氫-8-甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧高遷移率族蛋白B1-IgA抗體
果生鏈核盤 (2R,3S)-(-)-N-叔丁氧羰基-6-氧代-2,3-二苯基嗎啉抗卵巢抗體
香栓 2-辛基-2H-苯并三唑抗心磷脂抗體
栗疫 2-溴咪唑并[1,2-a]吡啶肝結合
鴨疫里氏桿 Boc-DL-色白介1受體
空泡單胞 5-乙?；?2(1H)-吡啶酮氨基?；?
糞生黑蛋巢 4-乙氧基鹽鹽死骨片1
普利茅斯沙雷氏 2,3-二氟-4-基苯CD90分子
孟氏假單胞 4-磺酰杯[4]芳烴水合物胰蛋白
畢赤酵母 5-溴-2-氟苯JAGGED1蛋白
漢遜德巴利酵母 N-[(1R)-2-[3-(氨基磺酰基)-4-甲氧基]-1-甲基乙基]乙酰視黃1
香矛假單胞 1-吡唑甲蛋白C抑制物
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