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貨號(hào)	FS-X9950

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱(chēng)：Mallory PTAH染色液(化學(xué)氧化法)

英文名稱(chēng)：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

貨號(hào)：FS-X9950

產(chǎn)品介紹:

用途：

肌纖維、纖維素的染色，尤其適用于橫紋肌/平滑肌染色

注意事項(xiàng)：

染色液采用化學(xué)氧化法使其成熟，但保存時(shí)間短，染色力同自然氧化法。橫紋肌的橫紋、纖維素、胞核、紅細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)纖維呈深藍(lán)色，膠原纖維、軟骨呈棕紅色。

儲(chǔ)存條件：室溫，避光，6個(gè)月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

立枯絲核菌1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框67抗體Human EYA2 兔子基質(zhì)金屬蛋白4(MMP-4)免疫試劑盒

大腸埃希菌1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框83抗體Human EYA4 兔子基質(zhì)金屬蛋白3(MMP-3)免疫試劑盒

無(wú)色殼囊孢富含半胱分泌蛋白3抗體Human EZH1 兔子基質(zhì)金屬蛋白13(MMP-13)免疫試劑盒

角磷灰鵝膏菌腫瘤/抗原26抗體Human FAM101A 兔子肌鈣蛋白C(TnC)免疫試劑盒

匍匐曲霉周期蛋白依賴(lài)性激抑制劑2C抗體Human FAM111B 兔子黃體生成(LH)免疫試劑盒

紋黑蛋巢Cullin2抗體Human EYA1 兔子環(huán)磷鳥(niǎo)(cGMP)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌鈣調(diào)蛋白激CaMK1D抗體Human EYA3 兔子核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)免疫試劑盒

長(zhǎng)枝木霉CHX10蛋白抗體Human EYA2 兔子核因子κB(NF-κB)免疫試劑盒

腹膜蒼黃球菌畸胎瘤衍化生長(zhǎng)因子單克抗體(C端)Human EXT2 兔子胱天蛋白3(Casp-3)免疫試劑盒

球孢白僵菌周期蛋白依賴(lài)性激抑制劑2B抗體Human FAM105A 兔子骨形成蛋白2(BMP2)免疫試劑盒

多殺性巴氏桿菌*畸胎瘤衍化生長(zhǎng)因子單克抗體Human EXOC1 兔子骨涎蛋白(BSP)免疫試劑盒

鮑氏不動(dòng)桿菌泛連接蛋白CHFR抗體Human FAM105A 兔子骨膠原交聯(lián)/Ⅰ型膠原C端肽(Cr/CTX-Ⅰ)免疫試劑盒

釀酒酵母Cullin1抗體Human EXOC5 兔子骨膠原交聯(lián)(Cr)免疫試劑盒

類(lèi)干酪乳桿菌肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白CFL抗體Human EXOC6 兔子骨堿性磷(BALP)免疫試劑盒

斑玉蕈軟骨衍生形態(tài)發(fā)生蛋白1抗體Human EXOC6B 兔子還原(GR)免疫試劑盒

泡盛曲霉β-酪蛋白抗體Human EXOG 兔子過(guò)氧化(GSH-Px)免疫試劑盒

傳染性法氏囊病病毒Avibirnavirus│Infectious bursal disease virus 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRToll樣受體3試劑盒牛磺熊去氧膽

結(jié)核分枝桿菌Mycobacterium│tuberculosis 質(zhì)量規(guī)格：BRToll樣受體2試劑盒牛磺

土壤黃色單胞菌Luteimonas│terricola 質(zhì)量規(guī)格：BRToll樣受體1試劑盒力農(nóng)
Mallory PTAH染色液(化學(xué)氧化法)枯草芽孢桿 2--5-吡啶酪蛋白激受體ErbB4

奇異鏈霉 (S)-N-芐氧羰基-3-氨基-3-苯基-1-磷化酪蛋白激受體ErbB2

芽孢桿屬 1-辛烯-3-乙酯磷化酪蛋白激受體ErbB4

釀酒酵母吡咯并[2,3-D]嘧啶-4(氫)-酮SMO同系物

球孢白僵 2,3,5-三氟芐γ分泌

灰黃淺黃酵母 2,4-二甲基吡咯-3,5-二羧乙酯鈣粘連蛋白

瘡痂病鏈霉 2,3,5-三氟苯乙鎂離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1

Corynebacterium sp. 4-溴-alpha-苯乙趨化

薄層屬 1H-吡咯并[2,3-C]吡啶-2-羧乙酯膽固-25-羥化

總狀毛霉 1,1,2-氧基乙烷載脂蛋白M

土壤短芽胞桿 Belleau's試劑法尼酯X受體

根霉 -1-乙肝三酰甘油脂肪

頭孢霉索非那新果糖激

黑曲霉 2-(苯磺酰基)吡啶抗凝血原抗體

迂回殼囊孢環(huán)己基肼鹽鹽蛋白酪磷
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)