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| 貨號 | FS-X9807 |
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中文名稱：神經元示蹤劑—核黃
英文名稱：Nuclear Yellow(Hoechst S769121)
產品規格：10mg
貨號：FS-X9807
產品介紹:
分子量：651.01 外觀：淡黃色粉末 溶劑：水或者DMSO 光學特性：Excitation = 355 nm; Emission = 495 nm. 儲存：-20℃，避光，有效期兩年。 Hoechst 系列染料是一類可用于應用于熒光顯微鏡和流式細胞術分析的標記DNA 的熒光家族染料。因其可以標記DNA，所以這類染料被廣泛的應用于細胞核和線粒體的可視化定位。Hoechst33258 和Hoechst33342 作為類二苯甲亞胺的染料，是其中廣泛應用的核酸染料。這兩種染料都可以被350nm 左右的紫外光激發，發射461nm 左右的藍紫色熒光。Hoechst 染料可以用于固定或者活細胞染色，也通常被用于另一種核酸染料的替代物，DAPI。他們之間重要的區別在于Hoechst33342 的乙基可以使其更具有親脂性，因此更易于穿過細胞膜。在一些應用中，Hoechst33258 相比Hoechst33342 表現出較差的膜透性。這類染料也常被用于檢測樣本DNA 的含量，只需要設置一個熒光強度-DNA 含量之間的標準曲線即可。 本產品是一種長波的核黃染料，通用和退行性示蹤標志染料真藍做神經元的雙色標記。在神經元細胞中，核黃優先染色細胞核為黃色熒光，而真藍作為一種紫外激發光激發的二價陽離子染料可以染色細胞質為藍色熒光。兩種染料在免疫組織化學應用中的表現都非常穩定，可以用于和DAB 染料的聯合應用。當Hoechst33258、Hoechst33342 和核黃通過軸突逆行運輸到母細胞體后，可能會遷出軸突和母細胞體，因此可以作為毗鄰神經膠質細胞細胞核的熒光染料。這種遷出現象在體內和體外的研究中，當您將切片保存于水性環境下，都有發現。使用1%示蹤劑時，活體內的遷出現象可以通過限制動物的生存時間而加以控制。體外的遷出現象可以通過材料組織的快速處理來避免。 |
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
成纖維細胞生長因子受體1(FGFR1)英文名：FGFR1 卷曲螺旋結構域蛋白157抗體包裝5g
成纖維細胞生長因子7(FGF7)英文名：FGF7 卷曲螺旋結構域蛋白90B抗體包裝10MG
成纖維細胞生長因子3(FGF3)英文名：FGF3 卷曲螺旋結構域蛋白144A抗體包裝25g
成纖維細胞生長因子23(FGF23)英文名：FGF23 卷曲螺旋結構域蛋白104抗體包裝5g
成纖維細胞生長因子18(FGF18)英文名：FGF18 卷曲螺旋結構域蛋白12抗體包裝1g
成纖維細胞生長因子15(FGF15)英文名：FGF15 卷曲螺旋結構域蛋白67抗體包裝25g
成纖維細胞生長因子13(FGF13)英文名：FGF13 卷曲螺旋結構域蛋白129抗體包裝5g
成纖維細胞生長因子12(FGF12)英文名：FGF12 卷曲螺旋結構域蛋白107抗體包裝1g
成纖維細胞生長因子11(FGF11)英文名：FGF11 卷曲螺旋結構域蛋白18抗體包裝5g
成纖維細胞激活蛋白α(FAPα)英文名：FAPα 卷曲螺旋結構域蛋白56抗體包裝1g
沉默調節蛋白6(SIRT6)英文名：SIRT6 卷曲螺旋結構域蛋白116抗體包裝5g
沉默調節蛋白1(SIRT1)英文名：SIRT1 卷曲螺旋結構域蛋白117抗體包裝1g
超氧化物歧化1(SOD1)英文名：SOD1 卷曲螺旋結構域蛋白127抗體包裝100g
腸型脂肪結合蛋白(FABP2)英文名：FABP2 卷曲螺旋結構域蛋白138抗體包裝25g
叉頭框蛋白P3(FOXP3)英文名：FOXP3 卷曲螺旋結構域蛋白144NL抗體包裝5g
立枯絲核菌Thanatephorus│cucumeris (A.B. Frank) Donk 質量規格：>99%,BR游離狀腺試劑盒2-O-乙酰山椒子烯;
龐蒂亞克亞硫鹽桿菌Sulfitobacter│pontiacus 質量規格：HPLC>98%,標準品游離睪試劑盒柚皮-7-O-葡萄糖;Narin
米曲霉Aspergillus│oryzae 質量規格：>98%,BR游離蛋白S試劑盒異飛薊賓;Isosilybin
神經元示蹤劑—核黃白色姜成林氏 2,3-二CD19分子
矮棒曲霉 N'-叔丁氧羰基-L-鳥結核
大腸埃希氏桿 曲洛斯坦GTP環化水解1
條紋雞樅 異酯烯乙酯肝鈉
擬青霉 非那吡啶鹽鹽五聚
泛屬 2,3-二氟苯丁膽固酰基轉移
擲抱酵母 硫代酰乙酯霍亂
黑木耳(植5) 6-甲基-2-吡啶甲甲酯線粒體解偶聯蛋白2
釀酒酵母 溴化六氨合鈷 (metals basis)抗連接IgG抗體
釀酒酵母 3-基-4-三氟抗Abeta IgG抗體
白色短波單胞 3-基-2,6-二-4-(三氟甲基)吡啶微管相關蛋白1A；1B輕鏈3B
挪威畢赤酵母 β-托品組蛋白脫乙酰基6
華根霉 3-氨基-2-溴-6-甲氧基吡啶腺
黃曲霉 鄰溴苯乙酯FAM19A4
香菇 吡唑解草酯抗風疹病IgG抗體
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