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| 貨號 | FS-X9614 |
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產品介紹:
CFSE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒是基于一種新型熒光探針CFDA SE的用于細胞增殖檢測和細胞熒光示蹤的檢測試劑盒。CFDA SE目前被廣泛用于替代MTT法或[3H]-thymidine摻入等其它細胞增殖檢測方法。 基于CFDA SE熒光標記的細胞增殖檢測和[3H]-thymidine摻入、BrdU標記獲得的檢測結果*一致，但同時可以提供更多的細胞增殖信息。使用CFDA SE檢測可以提供整個細胞群中有多少比例的細胞分裂了1次、2次或更多次數，同時如果和其它熒光探針聯用，可以獲取不同分裂次數細胞的其它相關信息。 CFDA SE 的全稱為Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，分子式為C29H19NO11，分子量為557.47。CFDA SE可以通透細胞膜，進入細胞后可以被細胞內的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以偶發性地(spontaneously)并不可逆地和細胞內蛋白的Lysine殘基或其它氨基發生結合反應，并標記這些蛋白。在加入熒光探針CFDA SE后大約24小時，即可充分標記細胞。被CFDA SE標記的非分裂細胞的熒光非常穩定，穩定標記的時間可達數個月。CFSE標記細胞的熒光非常均一，比以前使用的其它細胞示蹤熒光探針例如PKH26的熒光更加均一，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均勻。 由于CFDA SE標記細胞的熒光非常均勻和穩定，每分裂一次子代細胞的熒光會減弱一半，這樣通過流式細胞儀檢測就可以檢測出沒有分裂的細胞，分裂一次的細胞(1/2的熒光強度)，分離兩次的細胞(1/4的熒光強度)，分裂三次的細胞(1/8的熒光強度)以及類似的其它分裂次數的細胞。 CFDA SE標記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞增殖檢測。常用于淋巴細胞的增殖檢測，也可以用于成纖維細胞、NK細胞等其它細胞的增殖檢測，甚至還可以用于細菌增殖的檢測。 |
中文名稱：CFDA SE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒
英文名稱：CFSE Cell Proliferation and Tracking Kit
產品規格：2000T
貨號：FS-X9614
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
微粒體S轉移mei1(MGST1)檢測試劑盒 forMicrosomalGlutathioneSTransferase1(MGST1)
白介su2(IL2)檢測試劑盒 forInterleukin2(IL2)
分泌球蛋白家族2A成員2(SCGB2A2)檢測試劑盒 forSecretoglobinFamily2A,Member2(SCGB2A2)
腎胱su5(NPHP5)檢測試劑盒 forNephrocystin5(NPHP5)
速激肽受體1(TACR1)檢測試劑盒 forTachykininReceptor1(TACR1)
胰島su樣生長因子1(IGF1)檢測試劑盒 forInsulinLikeGrowthFactor1(IGF1)
旋轉蛋白(RTTN)檢測試劑盒 forRotatin(RTTN)
D-二聚體(D2D)檢測試劑盒 forD-Dimer(D2D)
內皮su轉化mei1(ECE1)檢測試劑盒 forEndothelinConvertingEnzyme1(ECE1)
脊髓灰質炎病毒受體相關分子4(PVRL4)檢測試劑盒 forPoliovirusReceptorRelatedProtein4(PVRL4)
Janus激mei3(JAK3)檢測試劑盒 forJanusKinase3(JAK3)
髓細胞觸發受體2(TREM2)檢測試劑盒 forTriggeringReceptorExpressedOnMyeloidCells2(TREM2)
脂蛋白關聯磷脂meiA2(LpPLA2)檢測試劑盒 forPhospholipaseA2,LipoproteinAssociated(LpPLA2)
載脂蛋白B48(APOB48)檢測試劑盒 forApolipoproteinB48(APOB48)
凝血mei原片段F1+2(F1+2)檢測試劑盒 forProthrombinFragment1+2(F1+2)
jia狀旁腺激su(PTH)檢測試劑盒 forParathyroidHormone(PTH)
促jia狀腺su(TSH)檢測試劑盒 forThyroidStimulatingHormone(TSH)
CFDA SE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒美替拉tong標準品 規格:200mg 英文名稱：Metyrapone
A相關物質B標準品 規格:20mg 英文名稱：
標準品 規格:200mg 英文名稱：Furosemide
水楊suan鈉標準品 規格:500mg 英文名稱：Sodium Salicylate
西他zuo相關物質A標準品 規格:50mg 英文名稱：
醋suanfu卡尼標準品 規格:200mg 英文名稱：Flecainide Acetate
溴化十烴季an標準品 規格:250mg 英文名稱：Decamethonium Bromide
尼汀標準品 規格:400mg 英文名稱：Levocarnitine
鹽suan芐非標準品 規格:200mg 英文名稱：
二類殘留溶劑-1,2-二lv乙烯標準品 規格:1.2ml×3ampules 英文名稱：
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