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DAPI溶液(1mg/ml)

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廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-05-09 13:20:25瀏覽次數:175次

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貨號 FS-X9669
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產品介紹:

本產品為DAPI水溶液,濃度為1mg/ml。使用時根據實驗不同直接將本產品用相應溶液稀釋到工作濃度。

號:28718-90-3

分子式:C16H15N5·2HCl

分子量:350.25

儲存條件:20℃避光保存,有效期至少2年

純度:≥90% (HPLC和 TLC)

DAPI(4’,6-二脒基-2-苯基吲哚)是一種能夠與DNA中大部分A,T堿基相互結合的熒光染料﹐常用于熒光顯微鏡觀測。因為DAPI可以透過完整的細胞膜﹐它可以用于活細胞和固定細胞的染色。當DAPI與雙鏈DNA結合時,大吸收波長為358nm,大發射波長為461nm。DAPI的發射光為藍色,且DAPI和綠色熒光蛋白GFP或Texas Red染劑(紅色熒光染劑)的發射波長僅有少部分重疊,可以利用這項特性在單一的樣品上進行多重熒光染色。

中文名稱:DAPI溶液(1mg/ml)

英文名稱:DAPI solution,1mg/ml

產品規格:1ml

貨號:FS-X9669

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

肝細胞生長因子(HGF)elisa檢測試劑盒  英文名稱:HGF ELISA Kit,HGF,

發動蛋白2(DNM2)elisa檢測試劑盒  英文名稱:DNM2 ELISA Kit,DNM2,

凋亡信號調節激meiI(ASK-1)elisa檢測試劑盒  英文名稱:ASK-1 ELISA Kit,ASK-1,

蛋白酪氨suan磷suanmei(PTP/PTPase/CD148)elisa檢測試劑盒  英文名稱:PTP/PTPase/CD148 ELISA Kit,PTP/PTPase/CD148,

an氧化mei(MAO)elisa檢測試劑盒  英文名稱:MAO ELISA Kit,MAO,

雌二chun(E2)elisa檢測試劑盒  英文名稱:E2 ELISA Kit,E2,

補體因子D(CFD)elisa檢測試劑盒  英文名稱:CFD ELISA Kit,CFD,

表面膜免疫球蛋白A(mIgA)elisa檢測試劑盒  英文名稱:mIgA ELISA Kit,mIgA,

白介su增強子結合因子2(ILF2/NF45/PRO3063)elisa檢測試劑盒  英文名稱:ILF2/NF45/PRO3063 ELISA Kit,ILF2/NF45/PRO3063,

卵巢癌抗原X1(OVX1)elisa檢測試劑盒  英文名稱:OVX1 ELISA Kit,OVX1,

酪氨酰tRNA合成mei(YARS)elisa檢測試劑盒  英文名稱:YARS ELISA Kit,YARS,

suan化細胞外信號調節激mei(pERK)elisa檢測試劑盒  英文名稱:pERK ELISA Kit,pERK,

可溶性白細胞抗原G(sHLA-G)elisa檢測試劑盒  英文名稱:sHLA-G ELISA Kit,sHLA-G,

人抗血小板抗體IgG(PA-IgG)elisa檢測試劑盒  英文名稱:PA-IgG ELISA Kit,PA-IgG,

人抗凝血meiIII(AT III)elisa檢測試劑盒  英文名稱:AT III ELISA Kit,AT III,

人抗核糖核蛋白抗體(RNP-Ab)elisa檢測試劑盒  英文名稱:RNP-Ab ELISA Kit,RNP-Ab,

人抗BB抗體(BB-Ab)elisa檢測試劑盒  英文名稱:BB-Ab ELISA Kit,BB-Ab,
DAPI溶液(1mg/ml)二異丙酚相關物質B標準品  規格:50mg  英文名稱:

suan二jia雙胍相關物質C標準品  規格:25mg  英文名稱:

suanan碘tong標準品  規格:200mg  英文名稱:Amiodarone Hydrochloride

si那標準品  規格:200mg  英文名稱:Mesna

奧利si他相關物質B標準品  規格:10mg  英文名稱:

伊立替康相關物質A標準品  規格:10mg  英文名稱:

二氫辣椒標準品  規格:25mg  英文名稱:Dihydrocapsaicin

替硝zuo標準品  規格:200mg  英文名稱:Tinidazole

三氨喋啶相關物質B標準品  規格:50mg  英文名稱:

氫溴suan加蘭他敏外消旋體標準品  規格:15mg  英文名稱:

 


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