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貨號	FS-X9812

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：羰化青DiI(神經(jīng)元示蹤劑)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：10mg

貨號：FS-X9812

產(chǎn)品介紹:

長鏈二烷基羰花青化合物，特別是Dil（分子量933.88），廣泛應(yīng)用于固定和非固定的組織與細胞中，進行順行或逆行的神經(jīng)示蹤分析。Dil 不會影響細胞的活力、生長以及基本生理特性。Dil 標記運動神經(jīng)元，可在培養(yǎng)基條件下持續(xù)跟蹤長達四周，在體內(nèi)長達一年。染料通過在質(zhì)膜中的緩慢橫向擴散均勻標記神經(jīng)元，0.2～0.6mm/每天/固定標本，在活體組織里，可以達到6mm/每天。經(jīng)過醛固定的組織，Dil 的擴增可以持續(xù)長達1～2年。一般情況下未標記的染料不會向非標記的細胞轉(zhuǎn)移，除非質(zhì)膜被破壞，比如切片部位

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

白介33(IL33)英文名：IL33 CD30抗體包裝1g

白介31(IL31)英文名：IL31 角蛋白19，17，14，42，10抗體包裝250mg

白介3(IL3)英文名：IL3 角蛋白10抗體包裝5g

白介2受體β(IL2Rβ)英文名：IL2Rβ 電壓依賴性鈣通道Cav1.1抗體包裝1g

白介2受體α(IL2Rα)英文名：IL2Rα 肌磷激2抗體包裝250mg

白介28A(IL28A)英文名：IL28A 煙堿型乙酰受體α7抗體包裝25g

白介27(IL27)英文名：IL27 離子通道調(diào)節(jié)蛋白1A抗體包裝5g

白介25(IL25)英文名：IL25 粘蛋白-1/上皮膜抗原抗體包裝100g

白介23(IL23)英文名：IL23 CWF19L1蛋白抗體包裝25g

白介22受體α2(IL2Rα2)英文名：IL2Rα2 心動加速蛋白多肽抗體包裝1g

白介22(IL22)英文名：IL22 通道相互作用蛋白3抗體包裝5g

白介21(IL21)英文名：IL21 12號染色體開放閱讀框29抗體包裝10MG

白介20(IL20)英文名：IL20 12號染色體開放閱讀框49抗體包裝25g

白介2(IL2)英文名：IL2 12號染色體開放閱讀框50抗體包裝5g

白介1受體關(guān)聯(lián)激2(IRAK2)英文名：IRAK2 12號染色體開放閱讀框53抗體包裝1g

大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR抑制β-B試劑盒原百部次堿 ;Protostemotin

小腸結(jié)腸炎耶爾森菌Yersinia│enterocolitica 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR,可用于培養(yǎng)抑制βA試劑盒原百部堿;protostemonine

亞鐵氧化硫桿狀菌Acidithiobacillus│ferrooxidans 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品抑制B試劑盒硬飛燕草堿 ; delsoline
羰化青DiI(神經(jīng)元示蹤劑)鼠強對照液（乙乙酯介質(zhì)） 2-(三氟甲基)異煙b型流感嗜血桿抗體

瓜果腐霉 5-三氟甲基煙抗髓過氧化抗體

粗糙艾美耳球蟲硒化銅(II)轉(zhuǎn)化蛋白RhoA

高盧蜜環(huán) Boc-L-4-基苯東南亞α-地中海貧血Zeta球蛋白鏈

玫瑰變紅鏈霉六氟異BK病

云微所奇異球 4-(2,3-Dimethyl-5-sulfo-3H-indol-3-yl)benzoic acidBK病特異性IgG抗體

芽孢桿屬 N,N-二異基乙三氫氟鹽整合αVβ1

馬賽 1-溴-3--5-苯25羥基膽固7α-羥化

林地蘑菇 N-叔丁氧羰基-N'-芴甲氧羰基-D-2,3-二氨基27羥基膽固

黑曲霉 5--1H-吡咯并[3,2-C]吡啶整合αV

優(yōu)美氈被孔 N-芐氧羰基-去甲托品酮整合β1

米根霉 2-溴-3-甲甲酯囊尾蚴病抗體

大豆擬莖點霉 3-苯甲氧基-5-溴吡啶

乳桿屬 3-甲酰肼肽基精脫亞氨Ⅱ

強壯類芽胞桿甘正酯.鹽鹽傷寒抗體
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)