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| 貨號 | FS-X9553 |
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英文名稱：Hoechst 33342
產品規格：10mg
貨號：FS-X9553
產品介紹:
本Hoechst 33342是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞的毒性較低。 Hoechst 33342染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。Hoechst 33342也常用于普通的細胞核染色，或常規的DNA染色。 Hoechst 33342的大激發波長為346nm，大發射波長為460nm；Hoechst 33342和雙鏈DNA結合后，大激發波長為350nm，大發射波長為461nm。 Hoechst 33342溶于水，溶解度可達20mg/ml。用于細胞核染色時，推薦的Hoechst 33342工作濃度為0.5-10μg/ml。 ：23491-52-3 分子式：C27H28N6O·3HCl·3H2O 分子量：615.99 儲存條件：-20℃避光，有效期一年。 |
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
基質細胞衍生因子2(SDF2)檢測試劑盒 forStromalCellDerivedFactor2(SDF2)
蛛毒su受體2(LPHN2)檢測試劑盒 forLatrophilin2(LPHN2)
促腎上腺皮質激su樣中葉肽(CLIP)檢測試劑盒 forCorticotropinLikeIntermediateLobePeptide(CLIP) 抗核膜糖蛋白210抗體(AGPA)檢測試劑盒 forAnti-Glycoprotein210Antibody(AGPA)
胰島su受體(ISR)檢測試劑盒 forInsulinReceptor(ISR)
鈉/葡萄糖協同轉運蛋白1(SGLT1)檢測試劑盒 forSodium/GlucoseCotransporter1(SGLT1)
整合suβ2(ITGβ2)檢測試劑盒 forIntegrinBeta2(ITGb2)
Toll樣受體4(TLR4)檢測試劑盒 forTollLikeReceptor4(TLR4)
鳥氨suan脫羧mei抗mei1(OAZ1)檢測試劑盒 forOrnithineDecarboxylaseAntizyme1(OAZ1)
二氫乳清suan脫氫mei(DHODH)檢測試劑盒 forDihydroorotateDehydrogenase(DHODH)
絲氨suan蛋白mei31(PRSS31)檢測試劑盒 forProtease,Serine31(PRSS31)
mei1(PON1)檢測試劑盒 forParaoxonase1(PON1)
性鞘磷脂磷suan二酯mei(Alk-Smase)檢測試劑盒 forAlkalineSphingomyelinase(Alk-Smase)
分泌型卷曲相關蛋白1(SFRP1)檢測試劑盒 forSecretedFrizzledRelatedProtein1(SFRP1)
Genethonin1蛋白(GEN1)檢測試劑盒 forGenethonin1(GEN1)
葡萄糖suanmeiβ(GUSβ)檢測試劑盒 forGlucuronidaseBeta(GUSb)
羧肽meiA3(CPA3)檢測試劑盒 forCarboxypeptidaseA3,MastCell(CPA3)
Hoechst 33342細胞藍色熒光染料辛伐他標準品 規格:200mg 英文名稱：Simvastatin
lv雷他定標準品 規格:200mg 英文名稱：Loratadine
左旋jia炔諾tong標準品 規格:200mg 英文名稱：Levonorgestrel
鹽suan舍曲林外消旋混合物標準品 規格:25mg 英文名稱：
鹽suan舍曲林標準品 規格:100mg 英文名稱：Sertraline Hydrochloride
鹽suan左卡巴斯汀標準品 規格:50mg 英文名稱：Levocabastine Hydrochloride
克肟標準品 規格:500mg 英文名稱：Cefixime
地尼相關物質B標準品 規格:10mg 英文名稱：
乙suanjia酯標準品 規格:1.2ml×3ampules 英文名稱：Methyl Acetate
奧利si他相關物質C標準品 規格:25mg 英文名稱：
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