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貨號	FS-X9718

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：細菌活性檢測試劑盒-CCK8

英文名稱：

產品規格：250T|500T|1000T

貨號：FS-X9718

產品介紹:

細菌活性檢測試劑盒 (CCK-8 法)是應用新型的水溶性四唑鹽2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽快速高靈敏度檢測細菌活性的比色檢測產品。

本四唑鹽在電子載體存在的情況下能夠被細菌的脫氫酶還原成橙黃色的水溶性的Formazan，生成的Formazan 量與細菌的活性成正比。細菌活性越強，則顏色越深；細菌活性越弱，則顏色越淺。對于同樣的細菌，顏色的深淺和細菌活性呈線性關系。

CCK-8溶液可以直接加入到細菌樣品中，不需要預配各種成分，CCK-8溶液很穩定，對細菌沒有毒性，可以長時間培養細菌。

儲存條件：2-8℃避光保存。長期不用分裝后-20℃避光保存。避免反復凍融。

注意：

1．CCK-8短期存放于2-8℃，長期存放請分裝后-20℃避光保存。

2．避免反復凍融。

3．凍存后溶解時注意重新混勻。

有效期：一年。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

多巴胺(DA)英文名：DA 自噬相關蛋白16A抗體包裝10mg

對基(PABA)英文名：PABA 磷化自噬相關蛋白4D抗體包裝10MG

端粒(TE)英文名：TE 磷化自噬相關蛋白4C抗體包裝1g

毒蕈鹼乙酰受體M2(CHRM2)英文名：CHRM2 磷化自噬相關蛋白7抗體包裝250mg

毒性休克綜合征毒1(TSST-1)英文名：TSST-1 磷化自噬相關蛋白16A抗體包裝5g

(AZT)英文名：AZT 磷化自噬相關蛋白9A抗體包裝10MG

凋亡誘導因子(AIF)英文名：AIF 磷化自噬相關蛋白4D抗體包裝1g

凋亡相關因子配體(FASL)英文名：FASL 磷化自噬相關蛋白4D抗體包裝1g

凋亡相關因子(FAS/CD95)英文名：FAS/CD95 磷化腫瘤血管內皮標志物8抗體包裝5g

第八因子相關抗原(FⅧAg)英文名：FⅧAg 磷化自噬相關蛋白4A抗體包裝1g

抵抗(Resistin)英文名：Resistin 磷化自噬相關蛋白4C抗體包裝5g

低氧誘導因子1α(HIF-1α)英文名：HIF-1α 磷化自噬相關蛋白16A抗體包裝100g

低密度脂蛋白免疫復合物(LDL-IC)英文名：LDL-IC 磷化蛋白激AKT3抗體包裝25g

低密度脂蛋白(LDL)英文名：LDL 磷化腎上腺能受體β2抗體包裝500g

蛋白磷(PP)英文名：PP 磷化通道蛋白2抗體包裝1g

凋亡蛋白活性因子-1抗體（C端）結締組織生長因子(CTGF)Ampalex (Ampakine CX516; CX516; BDP 12) is an ampakine and nootropic that acts a
細菌活性檢測試劑盒-CCK8害艾美耳球蟲鹽酸維拉唑酮活性氧簇

黃曲霉 3-氟-2-酸活性依賴性神經保護因子

泡盛曲霉正己基酸饑餓

球孢白僵 4-乙氧基-3-肌鈣蛋白I

肺炎克雷伯氏肺炎亞種 3-甲基噠肌鈣蛋白T

葡萄座腔辛酸硫酯血肌酐

炭黑曲霉 2-氟-3-甲氧基吡啶肌紅蛋白

凹陷芽孢桿 2-氨基-5-溴苯甲酰肌腱蛋白R

ATCC 6939 4-正辛基苯骨骼肌受體酪激抗體

蘇云金芽孢桿蠟螟亞種芬戈莫德肌球蛋白輕鏈激

枯草芽孢桿 1,3-二氫噻吩[3,2-D]嘧啶-2,肌球蛋白重鏈

巴斯德畢赤酵母 1-氟-4-羥基-1,4-重氮化二環2.2.2辛烷雙（四氟酸鹽）肌肉生長抑制;肌抑

豇豆慢生根瘤 4,4'-(2,3-乙烯基雙氧噻吩-5,7-二基)雙(N,N-雙(4-甲氧苯基)苯)肌酸激

大腸埃希 1-Boc-3-氨甲基肌酸激同工BB

葡萄座腔硫酸胱肌酸激同工MB
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)