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當前位置：上海撫生實業有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞凋亡與增殖>> Caspase3/7活細胞熒光實時法檢測試劑盒
| 貨號 | FS-X9580 |
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英文名稱：
產品規格：100T|50T
貨號：FS-X9580
產品介紹:
凋亡早期的重要特征之一是半胱氨suan特異性蛋白酶——caspase家族蛋白的活性激活。這一類酶可以參與到一系列的生化反應中，響應凋亡早期信號并導致相應的蛋白底物剪切，繼而引發細胞解體。目的底物可識別的序列包含天門冬氨suan殘基，剪切發生在序列的羰基段。 Caspase3/7活細胞熒光實時法檢測試劑盒采用新型的熒光底物為原料，可以檢測凋亡細胞中激活的caspase3/7.這種具有膜親和型的檢測試劑盒由一個4氨基的小肽（DEVD）和一種核酸結合染料。凋亡發生時，caspase3/7蛋白被激活，從而剪切caspase3/7識別序列DEVD肽段。剪切底物后，游離的核酸染料與DNA結合，從而發出亮綠色熒光信號。 操作步驟 1.1 以合適的培養基懸浮細胞或貼壁細胞，加入合適的化合物或藥物，刺激細胞誘導凋亡。 1.2 去除藥物或化合物，以新鮮培養基洗滌細胞2-3次，更換新鮮培養基后，以1μL/mL的量加入caspase3/7檢測液，使得caspase3/7檢測試劑工作液濃度為1μM。（注意： Caspase3/7 檢測試劑工作液濃度為0.5μM~2μM，您根據細胞量以及培養液的體積進行調整優化。） 1.3 37℃，避光孵育30min，或室溫孵育45-60min。 1.4 熒光顯微鏡觀察拍照或熒光光度計讀數。 |
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
一氧化氮合mei運輸因子(NOSTRIN)elisa檢測試劑盒 英文名稱：NOSTRIN ELISA Kit，NOSTRIN，
煙型受體α3(CHRNα3)elisa檢測試劑盒 英文名稱：CHRNα3 ELISA Kit，CHRNα3，
血小板反應蛋白2(THBS2)elisa檢測試劑盒 英文名稱：THBS2 ELISA Kit，THBS2，
阿mi巴(Amebiasis)elisa檢測試劑盒 英文名稱：Amebiasis ELISA Kit，Amebiasis，
α輔肌動蛋白4(ACTN-4)elisa檢測試劑盒 英文名稱：ACTN-4 ELISA Kit，ACTN-4，
β干擾su(IFN-β/IFNB)elisa檢測試劑盒 英文名稱：IFN-β/IFNB ELISA Kit，IFN-β/IFNB，
Toll樣受體4(TLR4)elisa檢測試劑盒 英文名稱：TLR4 ELISA Kit，TLR4，
P物質受體(SP-R)elisa檢測試劑盒 英文名稱：SP-R ELISA Kit，SP-R，
H-鈣粘著蛋白/H-鈣粘連蛋白(H-Cad/CDH13)elisa檢測試劑盒 英文名稱：H-Cad/CDH13 ELISA Kit，H-Cad/CDH13，
CX3C趨化因子受體1(CX3CR1)elisa檢測試劑盒 英文名稱：CX3CR1 ELISA Kit，CX3CR1，
B細胞受體相關蛋白31(BCAP31)elisa檢測試劑盒 英文名稱：BCAP31 ELISA Kit，BCAP31，
Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)elisa檢測試劑盒 英文名稱：Col Ⅲ ELISA Kit，Col Ⅲ，
3型1-磷suan鞘氨chun受體(S1P3)elisa檢測試劑盒 英文名稱：S1P3 ELISA Kit，S1P3，
脂聯su(Adiponectin)elisa檢測試劑盒 英文名稱：Adiponectin ELISA Kit，Adiponectin，
黑su瘤衍生亮氨suan拉鏈額外核因子(MLZE)elisa檢測試劑盒 英文名稱：MLZE ELISA Kit，MLZE，
(GSH)elisa檢測試劑盒 英文名稱：GSH ELISA Kit，GSH，
胱天蛋白mei激活的脫氧核糖核suanmei(CAD)elisa檢測試劑盒 英文名稱：CAD ELISA Kit，CAD，
Caspase3/7活細胞熒光實時法檢測試劑盒哌拉西標準品 規格:500mg 英文名稱：Piperacillin
環丙氨嗪標準品 規格:200mg 英文名稱：Cyromazine
碘海chun標準品 規格:200mg 英文名稱：Iohexol
jia磺suan培高利特標準品 規格:200mg 英文名稱：Pergolide Mesylate
尼莫地標準品 規格:125mg 英文名稱：Nimodipine
tong芬相關物質D標準品 規格:20mg 英文名稱：
噻康zuo標準品 規格:200mg 英文名稱：Tioconazole
benjiasuan標準品 規格:300mg 英文名稱：Benzoic Acid
L-賴氨suan鹽suan鹽標準品 規格:200mg 英文名稱：L-Lysine Hydrochloride
齊夫定相關物質C標準品 規格:100mg 英文名稱：
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