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| 貨號 | FS-X9582 |
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產品介紹:
DNA 在自由基（如·OH）的攻擊下容易發生損傷，即脫氧戊糖遭到破壞，磷酸二脂鍵的斷裂，堿基的破壞或脫落，便可進一步產生單鏈斷裂或雙鏈斷裂。將細胞固定于低熔點瓊脂糖中，取少量細胞涂在載玻片上，用堿高鹽溶液破壞細胞膜，再用堿溶液使DNA 分子解旋。將載玻片置于電泳液中，在電場的作用下，DNA 分子向陽極移動。如果DNA 損傷嚴重，碎片多，則電泳速度快。未受損傷的DNA 大分子則由于細胞膜的阻隔，滯留在原處。用PI 染色或銀染，可觀察到DNA 受損的細胞形同彗星現象，作定性分析。也可用相關的軟件作定量分析。 |
中文名稱：彗星電泳法檢測細胞損傷試劑盒
英文名稱：
產品規格：20T|100T|50T
貨號：FS-X9582
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
人抗Sa抗體(anti-Sa-Ab)elisa檢測試劑盒 英文名稱：anti-Sa-Ab ELISA Kit，anti-Sa-Ab，
金屬硫蛋白2(MT2)elisa檢測試劑盒 英文名稱：MT2 ELISA Kit，MT2，
新生jia狀腺su(NN-T4)elisa檢測試劑盒 英文名稱：NN-T4 ELISA Kit，NN-T4，
細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)elisa檢測試劑盒 英文名稱：ICAM-1/CD54 ELISA Kit，ICAM-1/CD54，
纖維蛋白(Fibrin)elisa檢測試劑盒 英文名稱：Fibrin ELISA Kit，Fibrin，
維生suD3(VD3)elisa檢測試劑盒 英文名稱：VD3 ELISA Kit，VD3，
銅鋅-過氧化物岐化mei(SOD1)elisa檢測試劑盒 英文名稱：SOD1 ELISA Kit，SOD1，
羰基還原mei[NADPH] 1(CBR1/CBR/CRN)elisa檢測試劑盒 英文名稱：CBR1/CBR/CRN ELISA Kit，CBR1/CBR/CRN，
suan性神經鞘磷脂mei(ASM)elisa檢測試劑盒 英文名稱：ASM ELISA Kit，ASM，
受磷蛋白(PLN)elisa檢測試劑盒 英文名稱：PLN ELISA Kit，PLN，
腎上腺皮質抗體(ACA)elisa檢測試劑盒 英文名稱：ACA ELISA Kit，ACA，
沙漠刺猬因子(DHH)elisa檢測試劑盒 英文名稱：DHH ELISA Kit，DHH，
熱休克蛋白72(HSP72)elisa檢測試劑盒 英文名稱：HSP72 ELISA Kit，HSP72，
Aprataxin蛋白(APTX)elisa檢測試劑盒 英文名稱：APTX ELISA Kit，APTX，
90kDa熱休克蛋白αA1(HSP90αA1)elisa檢測試劑盒 英文名稱：HSP90αA1 ELISA Kit，HSP90αA1，
Ⅹ型膠原(COL10)elisa檢測試劑盒 英文名稱：COL10 ELISA Kit，COL10，
210kDa核孔蛋白(NUP210)elisa檢測試劑盒 英文名稱：NUP210 ELISA Kit，NUP210，
彗星電泳法檢測細胞損傷試劑盒jia磺suan酚妥拉明標準品 規格:200mg 英文名稱：Phentolamine Mesylate
tong康zuo標準品 規格:200mg 英文名稱：Ketoconazole
異山75％溶液標準品 規格:1g 英文名稱：Isosorbide (75% solution)
鹽suan育亨賓標準品 規格:200mg 英文名稱：Yohimbine Hydrochloride
17- 雌二chun標準品 規格:50mg 英文名稱：17alpha-Dihydroequilin
秋水仙su標準品 規格:350mg 英文名稱：Colchicine
托普利二硫化物標準品 規格:100mg 英文名稱：Captopril Disulfide
jiaben磺丁脲標準品 規格:200mg 英文名稱：Tolbutamide
鹽suan四環su標準品 規格:200mg 英文名稱：Tetracycline Hydrochloride
巴噴丁相關物質A標準品 規格:50mg 英文名稱：
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